第四章 多肽与蛋白质类药物
多肽与蛋白质类药物
第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法 第二节 多肽类药物 第三节 蛋白类药物
多肽与蛋白质类药物
第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法
1.蛋白质类药物的分离纯化
2.多肽与蛋白质的化学合成
3. 基因工程法
第二节 多肽类药物
第三节 蛋白类药物
多肽与蛋白质类药物
（五）纯度检查
确定protein 的纯度标准一般为： 分子大小是否均一，电荷是否均一，是否
具有恒定的氨基酸组成，是否具有单一的N 端和C端残基，能否结晶，进一步纯化时生 物活性是否有所提高等。

（五）纯度检查
常用蛋白质纯度检查的方法有： 1．HPLC或FPLC 2．电泳均一性 3．免疫化学法 4．生物测定法 5. 分光光度法：A280/A260为1.75
1982年第一个基因重组产品--人胰岛素
优点：①可以大量生产过去难以获得的生 理活性蛋白和多肽；②提供足够数量的生 理活性物质，以便对其进行深入研究，扩 大应用范围；③生理活性物质作为药物使 用时存在的不足之处，可以通过基因工程 和蛋白质工程进行改造和去除；④利用基 因工程可获得新型化合物，扩大药物来源。
9．根据酶对蛋白质的作用来纯化蛋白质。 SOD
（四）溶液中蛋白质浓度的测定
1. UV法 （1）280nm光吸收法 （2）280nm和260nm的吸收差法
蛋白质浓度(mg/ml)=1.45A280-0.74A260 2. 双缩脲法:540nm 3. 福林-酚试剂法:750nm 4. 考马斯亮蓝G-250染色法:595nm
（一）材料选择
原料来源包括动物、植物及微生物等。选 择原料时应考虑来源丰富、目的物含量高、 成本低且易于提取的材料。
同时应考虑其种属、发育阶段、生物状态、 来源、解剖部位、生物技术产品的宿主菌 或细胞等因素的影响。
㈡提取
是分离纯化的第一步，是将目的物从复杂 的生物体系中转移到特定的人工液相体系 中。提取的总要求是最大限度的把有效成 分提取出来，关键是溶剂的选择。
多肽在生物体内的浓度很低，在血液中一般 为 1010 ~ 1012,m但ol它/ L们的生理活性很强，在调 节生理功能时起着非常重要的作用。
概述
活性多肽主要是从内分泌腺、组织器官、分泌细 胞和体液中产生或获得的。
1953年人工合成了第一个有生物活性的多肽——催产素（OT）。 到了60、70年代神经肽的研究进入高潮。同时，由于很多脑活性肽
促皮质素（ACTH），促黑激素（MSH） ② 下丘脑激素：
促甲状腺激素释放激素（TRH），生长素抑制激素 （GRIF） ③ 甲状腺激素：
甲状旁腺激素（PTH），降钙素（CT）。 ④ 胰岛激素：
研究活性多肽结构与功能的关系及活性多肽之间结构的异 同与其活性的关系 , 将有助于设计和研制新的活性多肽药 物。
临床上有一些确有疗效的组织提取制剂其有效成分有的还 不十分清楚，从活性肽或细胞生长调节因子的角度去研究 它们的物质基础和作用机制，预计可获得成效
主要多肽类药物
1．多肽激素 ① 垂体多肽激素：
多肽与蛋白质的化学合成
多肽合成可以验证一个新的多肽的结构； 设计新的多肽，用于研究结构与功能的关 系；为多肽生物合成反应机制提供重要信 息；也是多肽药物制备的有效方法。
多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程， 合成一般从C端向N端进行。
固相法合成多肽省时、省料、便于计算机 控制、便于普及推广
主要步骤：
第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法 第二节 多肽类药物
1.概述 2.主要多肽类药物 3.主要多肽类药物制备 第三节 蛋白类药物
多肽与蛋白质类药物
第一节 多肽及蛋白质类药物的生产方法 第二节 多肽类药物 第三节 蛋白类药物
1.概述 2.主要蛋白质类药物的制备
蛋白质类药物的分离与纯化
（一）材料选择 （二）蛋白质提纯的一般方法 （三）蛋白质的分离和纯化 （四）溶液中蛋白质浓度的测定 （五）纯度检查
也存在于胃肠道组织中，从而推动了胃肠道激素的研究. 到了70年代，生物技术的发展更开拓了多肽药物的新领域——细胞
生长调节因子。现已发现的细胞生长调节因子已近100种.
概述
许多活性蛋白质和多肽都是由无活性的蛋白质前体，经过 酶的加工剪切转化而来的。它们中间许多有共同的来源， 相似的结构，甚至还保留着若干彼此所特有的生物活性。
多肽类
概述
由氨基酸缩合而成的化合物称为多肽，它 们是通过一个氨基酸分子的-NH与另一分子 氨基酸的-COOH脱去一分子水形成-CONH-键而相互连接起来的。
概述
一般将50或50个以下的氨基酸残基组成的化 合物，列入多肽。多数无特定空间构象，某 些多肽也有一定构象，但其构象的坚固性远 不如蛋白质，其构象的浮动性很大。
⑴基团保护：把不应与接肽试剂发生作用 的官能团，加以封闭和保护。肽链形成之 后，再将保护剂去除。
⑵肽的合成：液相合成 固相合成
⑶合成肽链的纯化
基因工程法
基因工程技术就是将重组对象的目的基因 插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构 成工程菌，实现遗传物质的重新组合，并 使目的基因在工程菌内进行复制和表达的 技术。
选择标准：首先对制备物有最大的溶解度， 并在提取中尽可能减少一些不必要的成分。
㈢蛋白质提纯的一般方法
1．根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质。 2．根据蛋白质分子形状和大小不同来纯化蛋白质。
㈢蛋白质提纯的一般方法
3．根据溶解度的不同来纯化蛋白质。 4．根据电离性质的不同来纯化蛋白质。
对蛋白质的离子交换层析，一般多用离子交换纤维 和以葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等 为骨架的离子交换剂，主要是取其具有较大的蛋白 质吸附容量，较高的流速和分辨率等优点。
㈢蛋白质提纯的一般方法
5．根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质 亲和层析法 固相化金属亲和层析：干扰素、胃肠道多肽
6．根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来 纯化蛋白质。
7．根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋 白质
㈢蛋白质提纯的一般方法
8．根据蛋白质的选择性吸附性质来纯化蛋 白质。