肝硬化大鼠肝脏组织病理学及血流动力学变化作者：乔伟1,2，鲁建国1，王青1，李鹏超1 作者单位：(1. 第四军医大学唐都医院普外科，陕西西安710038;2. 西安市铁路中心医院普外科，陕西西安710054)【摘要】目的通过建立大鼠肝硬化模型，了解肝硬化形成过程中门静脉血流动力学的变化。
方法雄性健康SD大鼠100只随机等分为5组：4个实验组(80只，每组20只)采用腹腔及皮下注射四氯化碳(CCl4)，同时饮用酒精溶液进行诱导;对照组(20只)给予普通饮水和饲料。
分别于2、4、7、10周后观察肝脏的组织病理学改变及门静脉血流动力学变化。
结果肝硬化过程中肝细胞经历变性、坏死、纤维组织增生及假小叶的形成;血流动力学检测指标发生相应变化，平均动脉压(MAP)表现为逐渐下降，门静脉压力(PVP)、下腔静脉压(IVCP)及门静脉阻力(PVR)表现为逐渐升高，门静脉血流量(PVF)表现为先升高后下降，内脏血管阻力(SVR)表现为先下降后升高。
结论本方法可建立稳定的肝硬化门脉高压症模型，且适于大批量制作;在大鼠肝硬化门脉高压形成过程中门静脉血流动力学及肝组织病理学均发生了变化，可用于肝硬化门脉高压症方面的相关研究。
【关键词】肝硬化;门脉高压;组织病理学;血流动力学;大鼠Histopathological and hemodynamic changes of rats with liver cirrhosisQIAO Wei1,2, LU Jian guo1, WANG Qing1, LI Peng chao1(1. Department of General Surgery, Tangdu Hospital, Fourth MilitaryMedical University, Xi an 710038; 2. Department of General Surgery,Xi an Railway Center Hospital, Xi an 710054, China)ABSTRACT: Objective To investigate the hemodynamic changes during the progression of portal hypertension (PHT) by establishing a model of liver cirrhosis in rats. Methods Totally 100 healthy male SD rats were assigned to 5 groups randomly (1 control group and 4 experimental groups with 20 rats in each group). Animal model of cirrhosis was established by subcutaneous injection of carbon tetrachloride (CCl4) and drinking alcohol. Rats in control group were given water and forage. The changes in the portal hemodynamics during the pathological process of liver tissues were observed after 2, 4, 7 and 10 weeks. Results During the formation of experimental cirrhosis, the hepatocytes of rats underwent 4 processes: degeneration, necrosis, fibrosis and pseudolobular proliferation. The hemodynamic changes were observed: the mean arterial pressure declined gradually after injection, but the portal venous pressure, the inferior vena cava pressure and the portal vascular resistance increased slowly. The portal venous flow reduced after ascending whereas the splanchnic vascular resistance increased after descending. Conclusion This method can establish astable cirrhosis PHT model, which can be made in large quantities. During the progression of PHT, there are significant changes in portal vein hemodynamics and pathology, which can be used in related research on PHT.KEY WORDS: liver cirrhosis; portal hypertension; histopathology; hemodynamics; rat肝硬化是一种常见的慢性进行性肝病，由一种或几种病因长期或反复作用引起，以肝功受损和门静脉高压为主要表现。
在我国由乙肝引起的肝硬化门脉高压症远高于发达国家。
在现代肝脏外科研究中，人们认识到门静脉系统具有特殊的解剖结构，并且在功能上有分区现象，而门静脉血流动力学的改变是门脉高压症的重要发病机制。
血流动力学检测已成为评价门静脉高压症疗效的金标准[1]。
在本实验中，我们通过大鼠腹腔及皮下注射四氯化碳(CCl4)加饮用酒精溶液[2]，建立肝硬化大鼠动物模型，动态、连续监测肝硬化大鼠形成过程中的血流动力学指标，研究其变化规律，为有关肝硬化门脉高压症的动物实验提供模型基础。
1 材料与方法1.1 实验动物及分组雄性SD大鼠100只，清洁级，体重(240±20)g，购自第四军医大学实验动物中心。
随机等分为5组：前4组为实验组(共80只)，分别于造模第2、4、7、10周进行相关指标检测;第5组为空白对照组(20只)，于第10周进行相关指标检测。
1.2 实验器材及试剂995mL/L CCl4分析纯，乙醚，950、750mL/L医用酒精，肝素，大豆油，生理盐水。
TD型电子天平(余姚市金诺天平有限公司)，显微外科手术器械，压力换能器，四道生理记录仪(NIHON KOHDEN, Japan)，MFV 3200型电磁血液流量计(NIHON KOHDEN, Japan)。
1.3 实验准备将995mL/L CCl4与大豆油配成400mL/L、600mL/L的CCl4油溶液，950mL/L医用酒精与饮用水配成100mL/L的酒精溶液。
1.4 肝硬化模型的建立实验组大鼠前2周腹腔注射400mL/L CCl4油溶液，首次剂量按0.5mL/100g体重，以后按0.3mL/100g体重，每周2次，腹腔注射共4次;2周后改为600mL/L CCl4油溶液腹部皮下注射，按0.3mL/100g，每周2次，皮下注射共16次;同时给予100mL/L 酒精溶液喂养，自由摄取普通颗粒饲料。
对照组大鼠正常饮水及摄取普通颗粒饲料。
成模时间预计为10周。
1.5 检测指标及方法实验动物按照分组分别于第2、4、7、10周后进行血流动力学指标检测。
乙醚开放麻醉后，作剑突下正中切口，仔细游离门静脉，电磁血流量计测量门静脉血流量(portal venous flow, PVF)。
分别穿刺回结肠静脉、下腔静脉和腹主动脉，插入测压导管(导管内注入肝素生理盐水抗凝)，通过压力换能器与四道生理记录仪连接，分别测定门静脉压力(portal venous pressure, PVP)、下腔静脉压(inferior vena cava pressure, IVCP)和平均动脉压(mean arterial pressure, MAP)。
门静脉阻力(portal vascular resistance, PVR)和内脏血管阻力(splanchnic vascular resistance, SVR)按如下公式计算：PVR=(PVP-IVCP)/PVF;SVR=(MAP-PVP)/PVF。
检测完成后处死大鼠，取出肝组织做病理切片，HE染色了解病理变化情况。
1.6 统计学分析采用SPSS 13.0统计包进行统计分析。
MAP、PVP、IVCP、PVF和SVR的检测结果以均数±标准差(±s)表示，采用单因素方差分析，多重比较采用LSD t检验;SVR检测结果以中位数(M)和四分位间距(QR)表示，采用Kruskal Wallis秩和检验，多重比较采用Nemenyi检验。
以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 大鼠的一般情况实验组80只大鼠在诱导过程中精神萎靡，食欲不振，活动减少，对外界刺激反应迟钝，皮肤无光泽、体毛脱落，并且伴有体重增长缓慢;注射CCl4后共死亡13只，死亡原因为CCl4过量引起中毒所致。
存活大鼠67只，存活率82.75%。
对照组20只大鼠全部存活。
2.2 肝组织病理学改变对照组大鼠肝组织细胞大小一致,细胞排列呈条索状,以中央静脉为中心呈放射状,肝窦无狭窄，小叶及汇管区无炎细胞浸润(图1A);注射CCl4 2周后，大鼠肝脏轻度肿胀,镜下肝细胞肿胀,汇管区周围轻度气球样变(图1B);注射CCl4 4周后大鼠肝脏充血、肿胀,镜下肝细胞肿胀,气球样变加剧,仍以汇管区周围较明显(图1C);7周后大鼠肝脏充血、肿胀进一步加重，镜下见部分肝细胞变性、坏死，坏死以小叶周围显著，汇管区少量炎症细胞浸润及纤维组织增生(图1D);10周后大鼠肝脏萎缩明显,表面呈结节状，镜下可见肝细胞增生，汇管区纤维增生明显,包绕肝细胞形成大小不一的假小叶(图1E)。
2.3 门静脉系统血流动力学改变随着实验时间的延长，MAP变化表现为逐渐下降(P<0.05)，PVP表现为逐渐升高(P<0.05)，IVCP亦表现为逐渐升高，但组间差异无统计学意义(P>0.05)，PVF表现为先升高后下降(P<0.05)，SVR表现为迅速下降后稍有升高(P<0.05)，PVR表现为逐渐升高(P<0.05)。