流式细胞仪上机操作培训手册
一、样本处理
以PBMC表面抗原的流式检测步骤为例
1)取样。

取新鲜提取或冻存后复苏的PBMC；
2)编号。

根据实验设计，标记好流式管，如每份PBMC设两管：
a)1号管：相应同型对照；
b)2号管：CD3,CD4,CD8,CD56四标管；
3)加样。

用移液器取100ul细胞/管（约1×106个细胞/管），分别加到已经标记
好的流式管底部；
4)洗涤。

加入1ml PBS/管，涡旋1600rpm/min，离心6min；
5)染色。

弃上清，加入100 μl PBS/管涡旋混匀细胞，并根据实验设计，向各流
式管中加入相应的荧光素标记抗体，混匀，室温避光孵育30min（操作尽量保持在避光条件下进行。

）
6)洗涤。

加入1ml PBS/管，涡旋1600rpm/min，离心6min；
7)重悬。

弃上清，加入0.5ml PBS/管，混匀，上机检测(可选择BD FACSCanto
II或BD Accuri C6)。

（注：若不能及时上机，应加入4%多聚甲醛固定，并于4℃避光保存。

）8）试验结果分析。

（注：实验过程中如果进行多色标记，需要调节荧光补偿）。

参考值：
二、上机检测
BD FACSCanto II简要操作流程启动流式细胞仪
1 打开流式细胞仪电源
2 启动计算机，打开软件登录
3 确保软件连接到流式细胞仪
必要时，点击Cytometer > connect
检查液体水平
1 启动流式细胞仪后，检查液体水平
低液面水平或者废液桶满都用红色指示。

2 如果液流车未自动开启，选择Cytometer > Fluidics Startup。

3 当液流启动完成后，点击OK关闭对话框。

检查气泡
1 在检查完液体水平后，开启流动室门，检查流动室中是否有气泡。

2 如果没有看到气泡，进行第5步。

如果看到气泡，点击Cytometer > Cleaning Modes > De-gas Flow Cell.
3 当完成信息出现后，点击OK。

4 如果还可以看到气泡，重复上述操作。

注意：如果打开流动室细胞进口门时出现错误信息，通过关闭进口门，并等待30秒关闭该信息。

5 当您完成上述操作后，在往下进行之前请先检查激光预热是否已经完成。

创建实验
1 按照需要，在工作区工具栏中点击相应的按钮来显示浏览器、细胞仪、检测器、工作表、获取控制板和双指数编辑器窗口。

2 创建文件夹：
A 在浏览器中选择数据库图标，并点击浏览器工具栏上的New Folder。

B 对该文件夹命名。

3 选择该文件夹，点击New Experriment来创建一个新实验。

4 对该实验进行重命名。

5 选择实验级别的细胞仪设置，然后点击Inspector(检测器)中的Parameters(参数)选项卡。

6 按照需要变更，添加或者删除参数。