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四 操作步骤（2）
1制备土壤稀释液
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四、操作步骤（3）
挑菌落
接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
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四、操作步骤（4）
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四、操作步骤（4）
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四、操作步骤（5）
常用的接种方法： 划线接种 点接种 穿刺接种 涂布接种 液体接种 注射接种
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四、实验步骤——无菌水的制备
1.用量筒量取90ml水于带玻璃珠三角瓶中， 塞上棉塞，包扎牛皮纸。
2.用10ml吸管取9ml水于试管中，塞上棉塞， 包扎牛皮纸。
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四、实验步骤——器皿的准备
1.培养皿的包装：每10套一包，用旧报纸或 牛皮纸包扎（或放在特制铁皮圆筒里，加 盖扣严）。
2.吸管的包装：首先在吸管的上端塞上一小 段棉花，用长纸条包扎、打结。
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三、实验器材
1.药品及试剂：根据所要制备的培养基准 备所需试剂。
2.仪器及其它：试管、三角瓶、烧杯、量 筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、 pH试纸(5.5-9.0) 、棉花、牛皮纸、记号 笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布 棒、吸管（1ml）、玻璃珠、pH试纸等
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四、实验步骤——培养基的制备与分装
3.进一步熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用 方法。
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二、实验原理（1）
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基 质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在 自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目 的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一 般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微 生物对 pH 要求不一样，霉菌和酵母的培养基的 pH 一般是偏酸性的， 而细菌和放线菌的培养基的 pH 一般为中性或微碱性的 ( 嗜碱细菌和 嗜酸细菌例外 ) 。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将 培养基的 pH 调到合适的范围。
2. 土壤是微生物生活的Байду номын сангаас本营，可以从中 分离到很多有价值的菌株。本实验将采 用平板划线分离法。
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三、实验器材
1. 土样 2. 培养基 3. 无菌的培养皿、三角瓶、水、玻璃珠、
玻璃刮刀、吸管、枪尖等
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四、操作步骤（1）
1. 制备土壤稀释液 2. 涂布平板 3. 培养 4. 挑菌落 5. 平板划线分离 6. 菌种保藏（留作鉴定）
按培养基的物理状态分：固体培养基、半 固体培养基和液体培养基。
按培养基的用途分：基础培养基 、营养 培养基（加富培养基）、鉴别培养基和选 择培养基 。
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二、实验原理（3）
目前已有各种商品化的“干燥培养基”成品出 售。这种培养基是将新鲜配制的液体培养基用 喷雾干燥法、真空干燥法、低温干燥法或蒸发 干燥法等将培养基内所含的水分去掉；或将培 养基内的各种固形成分，经适当处理、充分混 匀，便成干燥粉末而成。使用时只要按比例加 入一定量的水，经溶解、分装，高压蒸气灭菌， 即可使用。这种培养基的优点是配制省时，携 带方便，使用简易，质量稳定。
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四、操作步骤（6）
斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞
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第二部分
微生物的分离与纯化
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一、目的要求
1.通过从土壤中分离纯化细菌，掌握微生 物的分离纯化方法和无菌操作技术。
2.初步掌握微生物的菌种保藏技术。
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二、实验原理（1）
1. 自然界中各种微生物混杂生活在一起， 要研究某种微生物的特性，首先须使该 微生物处于纯培养状态。从混杂的微生 物群体中获得只含有某一株微生物的过 程称为微生物的分离与纯化。
2.灭菌完毕，将试管培养基搁成斜面，搁置的斜面长度以 不超过试管总长度的一半为宜。培养基冷至50℃左右， 倒平板。
3.将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48h，以检 查灭菌是否彻底。
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五、思考题
1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？ 如何检查灭菌后的培养菌是无菌的？
2.加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要 压力表上的指针指到所需的压力时就能达 到所需灭菌温度？为什么？
此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因 此，已配制好的培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰 箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱 度所带来不利的影响。
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二、实验原理（2）
根据微生物的种类和实验目的不同，培养 基的类别如下：
按成分的不同：天然培养基 、合成培养 基和半合成培养基 。
实验二
土壤微生物的分离纯化与鉴定
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一 、目的要求
1.通过从土壤中分离纯化细菌，掌握培 养基的制备与灭菌技术、微生物的分 离纯化方法和无菌操作技术。
2.掌握微生物的鉴定技术
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第一部分
培养基的配制与灭菌
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一、实验目的
1.学习配制培养基的原理，并掌握配制培 养基的一般方法和步骤。
2.学习几种常用培养基的配制、分装和灭 菌的操作方法.
1.称量：按培养基配方比例依次准确地称取药品。 2.熔化：在沸水浴锅中或电炉上加热熔化。 3.调pH ：用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调pH至培养基所需pH。 4.过滤：趁热用多层纱布过滤（根据实际情况确定是否过滤） 5.分装：将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，注 意管口不要沾上培养基。液体分装装量不超过试管的1/4，固 体分装装量不超过试管的1/5，分装三角瓶的量不超过三角瓶 容积的一半，半固体分装装量为试管的1/3，灭菌后垂直待凝。 6.加棉塞：培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉 塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良 好的通气性能，然后包扎一层牛皮纸。试管应先捆成一捆后再 于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。
3.玻璃涂布棒的包装：方法同吸管的包装。 4.枪尖的包装：放入枪尖盒，牛皮纸包装。
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四、实验步骤——高压灭菌
1.将所要灭菌物品放入高压蒸汽灭菌锅内，根据需要设定 灭菌温度和时间（一般121℃，20min灭菌，若培养基 中含有葡萄糖等成分时，113 ℃，30min灭菌）。如因 特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。