离子选择电极( ion selective electrode, ISE)：操作简单，无需对样品进行欲 处理——无试剂分析(non-reagental analysis)，但是只能检测无机离子．
1956 Leland C. Clark Jnr 隔离式氧电极 1962 Leland C. Clark Jnr 酶传感器( enzyme transducer) 1967 S. J. Updike 葡萄糖酶电极 1975 Yellow Springs Instrument(YSI) 葡萄糖测定仪 1975 C. Divis 用完整活细胞取代纯酶制作传感器


1977 GA. Rechnitz 用粪便链球菌完整活细胞与氨敏电极组合成测精氨酸的 微生物电极
1977 Iso Karube和J. Janata 测BOD的微生物传感器和测抗原的免疫传感器
随后出现了细胞器传感器、细胞传感器和组织切片传感器
20世纪70年代中期到80年代，生物技术、生物电子和微电子学不断地渗透、融合，致使生 物传感器不再局限于生物反应的电化学过程，而是根据生物学反应中产生的各种信息(如 光效应、热效应、场效应和质量变化等)了设计各种精密的探测装置。
乙醇电极
ADH
C2H5OH+NAD+ NADH
C2H5O+NADH NAD++2e-+H+
乙醇在乙醇脱氢酶（ADH）存在下与 辅酶烟碱腺嘌呤二核苷（NAD）的酶 反应。将ADH和NAD+共同固定在各 种碳或铂的阳极上，研制出无需试剂 的传感器，以实现目标物质的检测。 NAD+可以通过NADH的电化学氧化 实现再生，测定产生的阳极电流
1974 K. Mosbach 热生物传感器
1974 Janata 酶场效应晶体管 1980 D. W. Lubbers 和N. Optiz 酶光纤传感器 1983 Giulbault 压电晶体酶传感器 1976 A. H. Clemens等报道了以葡萄糖酶电极为基础的第一个人工肾脏，随后被Miles公 司开发成生命稳定系统Biostator，用于重症糖尿病人床边监护。 1983 B.Liedberg利用表面等离子激元共振(Surface Plasmon Resonance)方法，能够适
脲电极
Urea + 2H2O
脲 酶
2NH4++2HCO3-
产生的2NH4+为阳离子电极感应。
原理：电极由掺有脲酶的 凝胶包裹的铵离子选择性 电极组成。产生的铵离子 在30-60s后达到稳态并由 铵离子选择性电极检出。 另外相应的质子浓度的变 化也可通过玻璃PH电极或 其他pH敏感电极检测
（三）DNA电化学传感器
氧电极
有不少酶特别是各种氧化酶和加氧酶在催化底物反 应时要用溶解氧为辅助试剂，反应中所消耗的氧量 就用氧电极来测定。此外，在微生物电极、免疫电 极等生物传感器中也常用氧电极作为信号转换器， 因此氧电极在生物传感器中用得很广。
目前用得最多的氧电极是电解式的 Clark氧电极， Clark氧电极是由铂阴极、Ag/AgCl阳极、KCl电解质 和透气膜所构成。
（二）电化学酶传感器
原理：首先将酶固定在电极上，然后在酶的催化作用下，生 物分子发生化学变化，通过信号转换器记录变化从而间接测 定出待测物的浓度。
电化学酶传感器的发展阶段
第一代酶传感器：以自然界存在的氧作为媒介体 来沟通酶与电极之间的电子通道，将酶反应底物 的减少或产物的生成作为响应信号 第二代酶传感器：采用氧化还原电子媒介体在酶 的氧化还原活性中心与电极之间传递电子，通过 检测媒介体的信号变化来反应底物浓度的变化 第三代酶传感器：以酶的氧化还原活性中心直接 和电极表面交换电子的酶电极传感器，这种传感 器不需要加入其它试剂，利用酶自身与电极之间 直接产生电子转移。
电化学生物传感器优点：灵敏度高，易微型化，能在复杂 体系样品中进行检测等优势，已广泛应用于医疗保健，食 品工业，农业和环境监测等领域。
电化学生物传感器的基本组成和原理
组成：生物识别元件，信号转换器，数据分析仪
Hale Waihona Puke 二、电化学生物传感器的信号转换器
离子选择电极 电位型电极
氧化还原电极
电化学电极
电流型电极
葡萄糖传感器
由酶膜和Clark氧电极或过氧化氢电极 组成。在葡萄糖氧化酶（GOD）的催化作用 下，葡萄糖（C6H12O6）发生氧化反应，消 耗氧气（O2）生成葡萄糖酸内酯（C6H10O6） 和过氧化氢（H2O2）。GOD被半透膜通过物 理吸附的方法固定在靠近铂电极的表面，其 活性依赖于其周围的氧浓度。葡萄糖与GOD 反应，生成两个电子和两个质子。 被氧及电子质子包围的还原态GOD经过反应 后，生成过氧化氢及氧化态GOD，GOD回到最 初的状态并可与更多的葡萄糖反应。葡萄糖 浓度越高，消耗的氧越多，生成的过氧化氢 越多。葡萄糖浓度越少，则相反。因此，氧 的消耗及过氧化氢的生成都可以被铂电极所 检测，并可以作为测量葡萄糖测定的方法。
电化学生物传感器
什么是生物传感器？
生物传感器一般以生物活性物质（例 如酶，细胞，抗体，核酸适配体等）为生 物功能性敏感基元，并将其固定在信号转 换器上，当加入目标物之后通过信号转换 器转化为相应光学，热学，电学等信号的 检测器。
生物传感器的发展历程
20世纪60年代酶法分析：专一性强、灵敏度高、操作简便，但是测定周期长。
1、酶的固定化技术
惰性载体——物理吸附法 离子载体—交换法 活化载体—共价结合法
物理包埋法
乔丽娜,周在德.化学研究与应用.2005,17(6):299~302
物理吸附法 酶分子通过极性键、氢键、疏水力或π电子相互作用等吸 附于不溶性载体上。 常用的载体有：多孔玻璃、活性炭、氧化铝、石英砂、纤维 素酯、葡聚糖、琼脂精、聚氯乙烯、聚苯乙烯 已用此法固定化的酶如： 脂肪酶、α－D葡萄糖苷酶、过氧化物酶等 交换法 选用具有离子交换剂的载体，在适宜的pH下，使酶分子与 离子交换剂通过离子键结合起来，形成固定化酶。 常用的带有离子交换剂的载体如下： DEAE一纤维素、TEAE一纤维素、 AE—纤维素、CM—纤维素、 DEAE一葡萄糖、肌酸激酶
2001年 Diiksma 用交流阻抗法测定了γ －干扰素,下限达到0.02 fg/ ml。(Diiksma M, Kamp B , Hoogvliet J C , et al . Development of an
electrochemical immunosensor for direct detection of interferon-γ at the attomolar level [J ] . Anal Chem,2001 ,73 (3) :901-907)
2、电流型电极
电化学生物传感器中采用电流型电极为信号转 换器的趋势日益增加，这是因为这类电极和电位型 电极相比有以下优点：
①电极的输出直接和被测物浓度呈线性关系，不像 电位型电极那样和被测物浓度的对数呈线性关系。 ②电极输出值的读数误差所对应的待测物浓度的相 对误差比电位型电极的小。
③电极的灵敏度比电位型电极的高。
氧电极
1、电位型电极
离子选择电极
离子选择电极是一类对特定的阳离子或阴离子 呈选择性响应的电极，具有快速、灵敏、可靠、 价廉等优点。在生物医学领域常直接用它测定 体液中的一些成分（例如 H+ ， K+ ， Na+ ， Ca 2 + 等）。 氧化还原电极 氧化还原电极是不同于离子选择电极的另一类 电位型电极。这里指的主要是零类电极。
时的对生物亲和反应进行检测，在次基础上，瑞典Pharmacia公司在1990年推出商用仪器
BIAcore，成为目前研究生物分子之间互相作用最优秀的实验工具。 1984 A.E.G. Cass 首次建立了介体酶电极方法,利用化学介体戊二醛取代分子氧作为氧化 还原酶酶促反应的电子受体,促成了1987年美国MediSene 公司开发成功印刷酶电极.
电化学生物传感器
电化学生物传感器作为最早问世的一类生物传感器 主要是采用固体电极作为基础电极，将生物活性作为分子 识别物固定在电极表面，然后通过生物分子间的特异性识 别作用，使目标分子捕获到电极表面，基础电极将浓度信 号转换成电势，电流，电阻或电容等可测量的电信号作为 响应信号，从而实现对目标分析物的定量或者定性分析。
电导型免疫传感器
原理 化学反应产生或消耗的离子,能使溶液的导电能力发生改变。 应用 1996年 Yagiuda用电导法测定了尿中的吗啡.(Yagiuda K,Hemmi A , Ito
S , et al . Development of conductivity- based immunosensor for sensitive detection of methamphetamine (stimulant drug) in human urine[J ] .Biosens Bioelectrion ,1996 ,11 (8) :703-707.)
电位型免疫传感器
原理 利用抗原或抗体在水溶液中两性解离本身带电的特性, 将其中一种固定在电极表面或膜上,当另一种与之结合形 成抗原抗体复合物时,原有的膜电荷密度将发生改变,从而 引起膜的Donnan 电位和离子迁移的变化,最终导致膜电位 改变。
参比电极
结合抗体的膜 原理：先通过聚氯乙烯膜把抗体固 定在金属电极上，然后用相应的抗 原与之特异性结合．抗体膜中的离 子迁移移率 随之发生变化，从而使电极上的膜 电位也相应发生改变。膜电位的变 化与待测物浓度之间存在对数关系
Xiaoping Liu,Oihui Liu.Nitric Oxide.2005,13(1):68~77
三、电化学生物传感器的分类
（根据敏感物质分类）