4.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚成心功脏进组行织了块传进代行培原养代；培养
和传代培养。
发明了卡氏瓶；
5.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞
克隆。
标志着组织培养工作进入
6.1950年，人工培养液“199全”研新制阶成段功
7.1951年，海拉细胞系的建成。
三、动物细胞培养过程
（一）培养条件 1.含全部营养物质的培养液
1.运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？ 2.能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来
产生单一类型的抗体呢？
单克隆 抗体
-化学性质单一、特异性强的抗体。
设计方案：
一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体
小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞 尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。
• 生物法：灭活的仙台病毒诱导融合（特有）
这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十 分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可 能还有促进细胞融合的功能。
细胞膜被 病毒颗粒穿通
• 化学法：聚乙二醇诱导融合（应用最广泛）
• 物理法：电刺激诱导融合
细胞膜连接
细胞融合、形成杂种细胞
5. 应用
此技术有什么缺点和优点？
成分：水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等
2.适宜的环境条件
无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液 适宜的温度和pH值：温度：36.5±0.5 ℃
pH值：7.2-7.4 适宜的气体环境：O2和CO2（95%空气和
5%CO2） 适宜的渗透压等
（二）培养过程
卡氏瓶
原代培养
四、细胞系、细胞株
1.由于细胞杂交中染色体容易丢失，因此利用杂交细 胞检测特定染色体丢失与特定基因产物减少的对应关 系，可以进行基因定位。
2.克服远缘杂交不亲和的障碍
鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、 人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡 、人—胡萝卜等
3.利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。
读下面一段文字资料，思考以下问题：
一、动物细胞、组织培养
1.什么方法取得离体的单个动物细胞？
机械消化或者胰酶消化（胰蛋白酶）
2.离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正 常的生命活动？
能，在人工控制的培养条件下，生长、分裂乃至 接触抑制和衰老、死亡等，并呈现一定的组织特性。
3.是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表现 出生命活动？
三、动物的细胞融合技术及其应用 ★ 什么是细胞融合技术？ ★ 为什么要进行细胞融合？ ★ 如何实现细胞融合？
1.动物细胞融合
定义 指用自然或人工方法, 使两个或多个不同的细胞融 合成一个细胞的过程。
不同基因型的细胞之间的融 合就是细胞杂交。
受精作用
两个细胞正在融合
诱导融合的因素
病毒颗粒黏 附细胞表面
5.提高细胞克隆形成率的措施：
•选择适宜的培养基 •添加血清 （胎牛血清） (能促进细胞的生长、增殖和贴附) •以滋养细胞支持生长（经射线照射的小鼠成纤维细胞） •激素刺激（胰岛素等） •使用CO2培养箱，调节PH
6.细胞克隆的主要用途：
从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。
用于研究细胞的遗传规律和生理特性。
使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。
异质性细胞系 克隆培养
纯系（克隆）
2.特点： 遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究
3.最基本要求: 保证所建成的克隆来源于单个细胞
4.适合于克隆的细胞：
对环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞
群体细胞> 单细胞
无限细胞系、转化或肿瘤细胞 >原代细胞、有限细胞系
如：单抗细胞株 细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、 病毒敏感性和生化特性等。遗传物质未改变。
有限细胞株：传代次数有限的细胞株
连续细胞株：可连续多次传代的细胞株。
细胞系：泛指可传代的细胞。 细胞株: 具有特殊性质的细胞系。
五、克隆培养法（细胞克隆）
1.概念： 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，
长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反 复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗 体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而 且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发 现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可 以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细 胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想 获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁 殖，即克隆。
单抗的制备过程
1.用外界抗原刺激动物（如 小鼠，兔子等），使其产生
1免.体疫外反培应养，：使通B过淋动巴物细细胞胞产培 养生技抗术体获；得大量的杂交瘤细胞， 从抗2细体.利胞；用培仙养台液病中毒获或得聚的乙单二克醇隆 2等.体作内为培介养导：，将使杂经交免瘤疫细的胞动注 射物到的小脾鼠细的胞腹与腔可中以增无殖限，传最代后 从的小骨鼠髓的瘤腹细水胞中融提合取；、纯化单 克隆抗体。 （3）经过筛选、克隆培养 ，获得来自单一细胞的既能
原代培养物
细胞系：可连续传代的细胞
传
原代培养物在首次传代时就
代
成为细胞系。
培
能连续
不能连续
养
培养的
培养的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
连续细胞系 有限细胞系
（异倍体核型细胞）（二倍体细胞）
（ （12…） ）…恶保…性留…细接胞触系抑，制异，体不致致瘤癌性
（遗传物质改变，不死性）
2.细胞株：
通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或 细胞系中获得的具有特殊性质的细胞系。
动物器官培养：体外培养动物器官原基、部分
或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的 结构、功能及分化能力。
二、动物组织培养技术的发展
1.1885年，鸡神经板在生理盐水“组中织培培养养成”活一。词产生
2.1903年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月， 且观察到细胞分裂。 3看.1到9神07经年末，端蛙的胚阿神米经巴管运在动蛙。淋巴真创液立正中了的悬悬组浮浮织培培培养养养，法开成始功；
(1)幼嫩细胞（如：动物胚胎或幼龄动物组织、器官）
(2)含全部营养物质的液体培养基和适宜的环境条件。
组织培养
动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内一 样呈现一定的组织特性。
动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持
生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最 终成为细胞培养。
1.动物细胞全能性的特点？ 随着细胞分化程度的提高而全能性逐渐受到限制，
分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。
2.离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆 成完整的植株，那么动物细胞和组织能否也进行同 样的克隆？ 不能，动物细胞的全能性受到限制，到现在为止 将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以 动物细胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。