• ②过程常用的方法是__显_微__注_射__法。 • (4)转入生长激素基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生
长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必 须含有__启_动__子___。
• 6.如图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操 作过程示意图，请据图作答：
• _(_1_)能不__能否__利_为用什人么的？皮肤细胞来完成①过程？ _由__于_基_因__选_择_性__表_达_，__人_的_皮__肤_细_胞__胰_岛__素_基_因__不_能_表__达_得_到__胰_岛_素___。
• 4.有时还需进行 个体生物学水平的鉴定。如 转 基因抗虫植物是否出现抗虫性状
1.为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶 基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。下图 是获取植酸酶基因的流程。据图回答下列问题：
(1)B过程需要的酶是 反所使用的DNA连接酶有两类，
即 T4 DNA 连 接酶和 E·coli DNA连接酶。
（4）反转录作用的模板是 mRNA ，产物是 DNA 。若
（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型 有 平末端和黏性末端 。
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用 EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须 具有的特点是切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同 。
• 2.常用的转化方法： • a将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 _
__________，其次还有 ___________和 _________ __等。 • b将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 __ _________。此方法的受体细胞多是 ___________。 • c将目的基因导入微生物细胞：最常用的方法是__ _________，原核生物作为受体细胞的原因是 ___ ________，最常用的原核细胞是 ___________ ， 其转化方法是：先用 _________处理细胞，使其 成为 ___________ ，再将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度 下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。
• (3)Ti质粒原存在于_农__杆_菌__细_胞__质__ 中， 其上的T-DNA具有可 转移到受体细胞并整合到受体细胞的__染__色__体_D_N_A __上的特点， 因此携带外源基因的DNA片段必须插入到_T_-_D_NA_片__段_(_内__部) 部位。
• (4)农杆菌转化法适于将目的基因导入__双_子__叶_植__物___和祼子植 物，而不易于感染大多数__单__子_叶__植_物。
•
专题1 基因工程
• （一）基因工程的基本工_
• （1）来源：主要是从___________中分离纯化出来的。
• （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种____ 的核苷酸序列， 并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的___________ 断开，因此具有专一性。
• 5.应用生物工程技术可获得人们需要的生物新品种或新 产品。请据图回答下列问题：
• (1)要获得抗虫基因，可采用 ___从__基_因__文_库__中_获__得_目__的_基__因_、__PC_R_技_术__扩_增__目_的__基_因__、_人__工_合__成_____ 等方法，基因工程的核心是__基__因_表__达_载__体_的__构_建______。
mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技 术称为____分_子__杂__交__技_术____。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否 翻译成_人__胰__岛__素_，常用抗原—抗体杂交技术。
(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的 基因插入农杆菌Ti质粒的___T-_D_N_A__中，然后用该农杆菌感染植物细 胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的_染__色__体_的__DNA 上。
用_D__N_A_双__链_ 复 制 的原理，将基因的核苷酸序列不断加以
复制，使其数量呈指数增长。
• (3)图中__启__动__子__位于目的基因的首端，是_R_N_A_聚__合__酶 识别 和结合的部位。抗生素抗性基因的作用是作为__标__记__基__因 ，
用于鉴别受体细胞中是否导入了目的基因。
• 3.农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞采用 最多的方法。下图为农杆菌转化法示意图，请 据图回答问题：
• (5)若将相关的目的基因导入动物细胞或微生物细胞则常采 用__显__微_注__射__技_术____和_C_a_2＋_处__理_法__或__感_受__态_细__胞_法__。
4.回答有关基因工程的问题：
• (1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可 能产生黏性末端，也可能产生__平______末端。若要在限制酶切割目 的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生 ____相_同___(填“相同”或“不同”)黏性末端的限制酶。
(2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基 因及其启动子等，其中启动子的作用是_____________ • __R_N_A__聚_合__酶__识__别_和__结__合__的_位__点__，__有_了__它__才__能_驱__动__基__因_转__录__出__m_R_N_A________ • 在用表达载体转化大肠杆菌时，常用_C_a_C_l2_溶__液_(或Ca2＋) 处理大肠杆 菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了
• （3）条件：______________________
• 第二步：___________ • 1.目的：使目的基因在受体细胞中________，
并且可以________，使目的基因能够________ ___。 • 2.组成：______________________ • （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段， 位于基因的______，是___________识别和结 合的部位，能驱动基因___________，最终获 得所需的蛋白质。
• 3.“分子运输车”——___________ • （1）载体具备的条件：①___________ • ②___________，供外源DNA片段插入。 • ③___________，供重组DNA的鉴定和选择。 • （2）最常用的载体是___________,它是一种
裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之 外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 • （3）其它载体： ___________
• (4)C的组成除必须含有_目_的__基_因___、__标_记_基__因__、复制 原点外，还必须有__启_动_子____和____终_止__子_。
• (5)图中的D是基因工程中的受体细胞，为了使过程 ⑧更易进行，可__Ca_2_＋____处理D。
• 1．[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）
• 第四步：___________
• 1.首先要检测 转基因生物的染色体DNA上是否 插入了目的基因，方法是采用 ___________。
• 2.其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA， 方法是采用___________。
• 3.最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法 是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体 进行___________。
• （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片 段 ，位于基因的_____。
• （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞 中___________，从而将___________筛选出来。
• 第三步：___________ • 1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并
且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。D_N__A__和_c_D__N_A___为模板直接进行
PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是 ____耐__高__温____。
2.请据图回答下列问题：
• (1)基因工程的核心步骤是__基__因__表__达。载体的构建 • (2)利用__P_C_R____技术可以获得大量的目的基因。该技术利
• （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形 式：________和_______。
• 2.“分子缝合针”——___________
• (1)两种DNA连接酶（___________和___________）：
• ①相同点：都缝合___________键。
• ②区别：E·coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的_______ ____之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合___ ________，但连接平末端的之间的效率较低。
• (2)如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体 细胞通常是__受_精__卵___，原因是__动__物_受__精_卵__具_有__全_能__性______。
• 若用大肠杆菌储存目的基因，则需先将其处理为 __感_受__态___细胞。
• (3)在培育转人生长激素基因牛的过程中，①过程需要 的工具酶是_限_制__酶_、__D_N_A_连_接_酶________，
• (二)基因工程的基本操作程序 • 第一步：___________ • 1.目的基因是指： ___________。 • 2.原核基因采取___________获得，真核基因
是___________。人工合成目的基因的常用方 法有____________和____________。 • 3.PCR技术扩增目的基因 • （1）原理：___________ • （2）过程：第一步：_______，DNA解链；第 二步：______，引物结合到互补DNA链；第三 步：________，热稳定DNA聚合酶从引物起始 互补链的合成。
• 3.农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞采用最多的方法。 下图为农杆菌转化法示意图，请据图回答问题：
• (1)Ti质粒多存在于细菌中，它是能自我复制的 _____小_型__环_状__D_N_A分__子___。