培养基适用性检查方法的验证
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云南云科药业有限公司A：验证方案
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云南云科药业有限公司
目录
1．验证项目名称
2．验证组织
3．概述
4．验证目的
5．参照标准
6．验证程序
7．验证报告、评价及批准
1．验证项目名称：培养基适用性检查方法的验证
2．验证组织：
姓名部门职务分工
3．概述：
通过验证以确认所采用的方法适合于培养基适用性检查。

根据培养基及菌的特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

若符合，按验证的方法和条件
进行培养基适应性检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。

4．验证目的：
细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基的适用性检查。

验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。

（确认所采用的方法适合于培养基适应性检查，为了保证检验结果的准确性，对现有的检验方法进行验证。

）
5．参照标准：
2010年版《中国药典》二部附录ⅪJ 计数培养基的适用性检查。

6.验证程序：
6.1适用范围：适用于培养基适用性检查。

6.2被验证产品：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基。

6.3试验材料：
6.4试验菌株：
6.5合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

6.6验证方法：
培养基在使用前应进行适用性的检查，通过对被检培养基上的菌落与对照培养基上的菌落比较，以确认所采用方法的可行
性。

6.6.1菌液的制备：
6.6.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24小时。

取上述营养肉汤新鲜培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5～10-7约为50～100cfu/ml
的菌悬液备用。

6.6.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23～28℃培养24～48小时。

取上述改良马丁新鲜液体培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50～100cfu/ml的菌悬液备用。

6.6.1.3接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5 ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu/ml的孢子悬液备用。

6.6.2菌液的计数：（每种菌液接种2个平皿）
6.6.2.1分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），倾注营养琼脂培养基，凝固后于30～35℃倒置培养48小时。

6.6.2.2分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），倾注玫瑰红钠琼脂培养基，凝固后于23～28℃倒置培养72小时。

6.6.2.3菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表：
菌落计数结果（cfu/ml）
试验
次
数10-
5
10-
6
10-
7
1 2 平均 1 2 平均 1 2 平均
大
肠
埃
希
菌
金
黄
色
葡
萄
球
菌
枯
草
芽
孢
杆
菌
白
色
念
珠
菌
6.3适用性检查
6.3.1营养琼脂培养基6.3.2玫瑰红钠琼脂培养基6.3.3胆盐乳糖培养基6.3.4结果（见下表）
6.4结论
培养基适用性检查验证记录试验时间年月日试验时间年月日
试验菌株平皿号
供试品组
cfu/ml 对照培养基
组
cfu/ml
回收率应
≥70%
大肠埃希菌
（培养3天计数）
1 2
平均
金黄色葡萄球菌
（培养3天计数）
1 2
平均
枯草芽孢杆菌
（培养3天计数）
1
2
平均
白色念珠菌
1 （培养5天开始计数）
2
平均
黑曲霉
1 （培养5天开始计数）
2
平均
结论：
复核人试验人。