江门量子高科生物股份有限公司臭氧灭菌线灭菌一生糖瓶盖验证文件--生产三课2011年1月臭氧灭菌线灭菌一生糖瓶盖验证文件□公用系统□设备□清洁□工艺□制水系统□成本□其他_____________验证小组:组长：彭辉跃（生产部）签名/日期：组员：谢景强（工程部）签名/日期：李业宏（生产部）签名/日期：郑海源（质保部）签名/日期：莫建文（质保部）签名/日期：杨竞辉（质保部）签名/日期：冯坚良（质量管理委员会）签名/日期：报告：杨竞辉签名/日期：部门：质保部日期：2011-01-20目录1.验证背景…………………………………………第 4页2.验证目的…………………………………………第 4页3.验证范围…………………………………………第 4页4.验证地点…………………………………………第 4页5.验证对象…………………………………………第 5页6.验证设备…………………………………………第 5页7.验证试验所评估的指标…………………………第 5页8.验证试验的阶段分布……………………………第 5页9.验证方法…………………………………………第 6页10.验证周期…………………………………………第 13页11.验证结果汇总……………………………………第 13页12.验证结论…………………………………………第 13页13.验证报告…………………………………………第 13页14.验证证书…………………………………………第 14页一、验证背景臭氧灭菌线在2010年11月底，购自广州市科帮洁净工程技术有限公司，它是根据用户实际要求特殊制作的消毒传送设备。

其采用内置臭氧发生器，在相对隔离的传送带隧道内进行消毒的形式，对放置在输送带上的瓶盖进行有效的消毒。

利用FFU高效过滤单元传送带隧道内的空气不断循环，并通过中、高效过滤器对空气进行过滤，使隧道内空气达到10万级标准，有效保证了瓶盖不受粒子的污染。

内置一台20g/h的内置式臭氧发生器，两台500CMH可调风量FFU。

顶部装置一台排风机造成负压，使臭氧不致外排。

瓶盖灭菌线用于生产三课一生糖瓶盖灭菌用，在投产前，需要对消毒效果进行验证。

设备技术参数：名称数量规格备注输送带1条8000×800 0～0.3M/MIN臭氧发生单元6个每个40W内置臭氧发生器2个60W和80W 新增灭菌UV灯6根每根40WFFU 2个每个135W排风机1个0.27W二、验证目的验证臭氧灭菌线的灭菌效果。

三、验证范围生产三课臭氧灭菌线四、验证地点生产三课瓶暂存间内五、验证对象一生糖瓶盖（含外盖和内塞）六、验证设备仪器名称型号规格用途臭氧气体检测报警仪CPR-B6，0～100PPM 测试灭菌箱内臭氧浓度秒表液晶显示测试物体进出灭菌箱内所需的时间七、验证试验所评估的指标1000cfu/cm2以内的细菌到<10cfu/cm2的灭菌率为95%以上八、验证试验的阶段分布阶段起止日期验证项目验证内容/方法1 2010-12-12 输送带的速度输送带的速度2 2010-12-12 灭菌箱内臭氧浓度用臭氧报警仪3 2010-12-12 对臭氧灭菌线进行灭菌验证取干净空盖进行菌液涂抹，其中一半进行杀菌验证，另外一半作阳性对照。

4 2010-12-15 观察并记录验证结果计算灭菌率，确定有效性。

5 2011-01-02 输送带的速度输送带的速度6 2011-01-02 灭菌箱内臭氧浓度灭菌箱内臭氧浓度7 2011-01-02 对包材UV-臭氧杀菌线进行试提速杀菌验证取干净空盖进行菌液涂抹，其中三分之二进行杀菌验证，另外三分之一作阳性对照。

8 2011-01-5 观察并记录验证结果计算灭菌率，确定有效性。

92011-01-5 对来料空盖的微生物含菌量进行收集数据检测连续3批来料空盖的微生物含菌量，收集数据，制作曲线图。

九、验证过程1.瓶盖臭氧线安装完毕，经过安装确认、运行确认。

2.初次臭氧线测试2.1.初次臭氧灭菌线输送速度的测试：2.1.1.在入一生糖瓶盖灭菌箱前并靠近输送线的箱壁上相聚0.2米处分别用标签贴2个记号；置一小物体于第一个记号对应的输送线上，启动一生糖瓶盖臭氧灭菌输送带，记录该小物体由第一个记号到达第二个记号的时间。

记录见表格1初次检验输送线速度一览表。

表格1初次臭氧灭菌线输送速度一览表序号变频器读数运行开始时间运行结束时间标准运行时间Hz 时 - 分时 - 分min min1 29.3 14时 20 分14时 51分30 312 29.3 14时 20分14时51分30 31结论合格检测人：时间：复核人：时间：2.2初次臭氧浓度测试2.2.1启动PPU，排风机及臭氧发生器后，检查记录变频器的参数为29.3HZ,启动臭氧气体检测仪，分别放在灭菌箱的起点后约200MM及灭菌箱末端约200MM 处，放置5min后检查其臭氧读数；启动PPU，排风机、臭氧发生器及紫外灯（UV）后，检查记录变频器的参数为29.3HZ,启动臭氧气体检测仪，分别放在灭菌箱的起点后约200MM及灭菌箱末端约200MM处，放置5min后检查其臭氧读数。

结果见表格2初次检测臭氧浓度一览表。

表格2初次检测臭氧浓度一览表位置前端后端标准状态没开UV 开UV 没开UV 开UV臭氧浓度2.5 2.5 2.5 2.5 ≥15（PPM）结论不合格检测人：时间：复核人：时间：2.3.阳性菌灭菌验证：2.3.1.在12月12日，上午8:30至12：00，化验室制备不同浓度的混合细菌液（即分别用接种环将金黄色葡萄球菌株和大肠杆菌株各接一环至10ml已灭菌的生理盐水中，充分摇匀，并将菌种打散制成一个均匀菌液。

随后将两种菌液各吸0.5ml注入9ml已灭菌的生理盐水中，制成10-1浓度的混合稀释液，依次类推，制成10-1、10-2、10-33个不同稀释倍数的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的混合稀释液）。

用已灭菌的移液管分别吸取0.02ml的3个不同浓度的混合稀释液置于内塞内壁（每个稀释度取2个盖子），随后用预先润湿菌液的棉扦在空盖的内壁均匀涂抹。

每个浓度的混合细菌液涂抹2个空盖，1个作阳性试验，1个作阴性试验。

并放于实验室内的生物安全柜内晾干。

2.3.2.取涂抹有不同浓度菌液的空盖各1个不经UV灭菌，用作阳性试验对照；取涂抹有不同浓度菌液的空盖各1个于灭菌线上。

运行参数如表格3灭菌验证运行参数。

表格 3 灭菌验证运行参数变频器频率放入时间出来时间灭菌时间29.3Hz 16时15分16时46分31 min操作人：时间：复合人：时间：2.3.3.灭菌后，把全部的空盖放入干净的取样袋内，马上送化验室进行菌数检测。

2.3.4.阳性菌处理后，在恒温箱内36℃培养48h，微生物检测结果见表格10微生物检测结果。

表格4微生物检测结果金黄葡萄球菌+大肠杆菌灭菌前（盖口随机朝上或朝下）灭菌后（盖口随机朝上或朝下）101102103101102103 10-1X多不可计多不可计195 0 0 ----多不可计多不可计163 0 0 ----10-2X 36 6 ---- 0 0 ---- 48 0 ---- 0 0 ----备注：表中画“—”的地方表示无。

2.3.5.计算杀菌率2.3.5.1.结果分析：根据验证方案中不同稀释梯度的菌液所测的微检结果，选取最具代表性的数据进行计算处理。

依表格4中数据显示最具代表性的稀释梯度为10-1和10-2。

2.3.5.2.结果计算计算公式：灭菌率= ×100%计算式及计算结果如表格5瓶盖灭菌数据分析表格5 瓶盖灭菌数据分析表放置状态菌液浓度计算式标准实际灭菌率瓶盖口随机朝上或是朝下10-1X ×100%>95% 100.00% 10-2X ×100%>95% 100.00%结论合格灭菌前菌落数—灭菌后菌落数灭菌前菌落数菌液浓度稀释倍数（多不可计）×101/2-（0+0）×101/2（多不可计）×101/2（36+48）×101/2-（0+0）×101/2（36+48）×101/2计算人：时间：复核人：时间：3.在2010年12月质保部检查3批瓶盖的微生物指标，检验报告单编号及检验结果如表格6 瓶盖来料的微生物测试一览表。

检测方法：将10ml已灭菌的0.85%生理盐水加入到无菌小烧杯内，取无菌棉签浸润生理盐水后擦拭涂菌面后置于生理盐水中清洗，整个擦拭、清洗重复4次。

随后充分振荡均匀清洗过棉签的生理盐水，并取1ml做微生物检验。

表格6 瓶盖来料的微生物测试一览表空盖批号来料批号供应商报告单编号微检结果（cfu/瓶）1# 2# 3# 平均101211 10-12-27 穗联包装有限公司B1012043 0 0 0 0101212 10-12-29 穗联包装有限公司B1012048 0 0 0 0101214 10-12-31 东莞利族商贸有限公司B1012056 0 0 0 0结论来料瓶盖的微生物指标均合格，建议进入阳性菌灭菌测试。

检测人：时间：复核人：时间：4.根据检测结果，供应商决定增加2台内置式臭氧发生器，分别为60W和80W，它们和机内原有的6个O3臭氧单元统一开关控制，再重新测试。

2010年12月20日厂家增加了2台臭氧机，2011年1月2日，再次对瓶盖臭氧线进行灭菌测试。

4.1.一生糖瓶盖臭氧灭菌线输送速度测试。

4.1.1.在14时30分，启动PPU，排风机、检查记录变频器的参数，把计时器放在输送带灭菌箱的起点处，启动输送带，灭菌箱的长度为5.8米，然后让输送带送它到灭菌箱的终点，检查所用时间是否标准时间30分钟以上。

结果见表格7输送带测试一览表表格7输送带测试一览表变频器读数运行开始时运行结束时间标准运行时间间Hz 时 - 分时 - 分min min29.3 14时 45 分15时 16 分30 31结论合格检测人：时间：复核人：时间：4.2.一生糖瓶盖灭菌线臭氧浓度的测试。

4.2.1.在15时55分，启动臭氧发生器、紫外灯开关后，启动臭氧气体检测仪，分别放在灭菌箱的前端后约200MM、末端前约200MM处，检查其臭氧读数，标准为不低于15PPM。

结果见表格8 臭氧浓度测试结果。

表格8 臭氧浓度测试结果位置前端后端臭氧浓度PPM 3.4 3.7 4.3 4.2 标准PPM ≥15结论不合格应厂家要求，先进入下一阶段，阳性菌灭菌效果验证。

检测人：时间：复核人：时间：4.3.阳性菌灭菌验证4.3.1.在1月2日，上午8:30至12：00，化验室制备不同浓度的混合细菌液（即分别用接种环将金黄色葡萄球菌株和大肠杆菌株各接一环至10ml已灭菌的生理盐水中，充分摇匀，并将菌种打散制成一个均匀菌液。