聚合酶链式反应实验报告篇一：PCR实验报告普通生物学实验报告实验名称：用PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌肉一、特异性目的片段DNA的扩增（一）实验原理聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，其基本原理为DNA的半保留复制。

PCR技术由①高温变性模板；②引物与模板退火；③引物沿模板延伸这3步反应组成一个循环，通过多次循环反应，目的DNA 得以迅速扩增。

其主要步骤是：将模板DNA置于高温下（通常为93℃-94℃），使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因的两条单链互补结合；热稳定DNA聚合酶（Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板按5’→ 3’的方向延伸，合成互补链。

本实验采用物种特异性引物扩增的方法来鉴定3种不同物种来源的肌肉。

以不同物种来源的动物DNA为模板，用物种特异性的引物进行PCR扩增，只有在模板和引物的物种相对应的情况下才会有特异性条带的出现。

应用此方法，可以特异性地检测样品中痕量的特定DNA成分。

（二）实验步骤按下表将各成分分别加入一做好标记的无菌PCR管中，配制50μl的PCR反应体系，注意酶要最后加，加完后将PCR管放置在冰上。

2.将上述混合液稍加离心，约10s左右。

取下后立即置于PCR仪中，盖紧热盖，定好PCR仪的反应程序，执行扩增程序。

反应程序为：预变性94℃ 5min变性94℃ 5s退火50℃ 5s延伸72℃ 20s后延伸72℃ 5min3.反应结束后，终止程序，将PCR管取出，放置于4℃，待电泳检测。

循环30次二、水平式琼脂糖凝胶电泳法鉴定PCR产物（一）实验原理核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液（pH 8.0-8.3)中，其碱基不解离，而磷酸集团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。

琼脂糖主要是从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰，为一种聚合链线性分子。

使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异，从而达到分离的目的。

（二）实验步骤称取2.4g琼脂糖，放入250ml的锥形瓶中，加入120ml1×TAE缓冲液，微波炉高火加热约40s直至沸腾，摇动，使琼脂糖分散，在重复煮沸2次，直至溶液澄清透明。

待琼脂糖温度降到60℃左右时，按1:200的浓度加入Golden View,混匀后倒入已插上合适齿孔梳子的模具中，静置，约30-45min后凝胶完全凝固。

轻轻的垂直拔出梳子，将凝胶取出，放入电泳槽中，添加1×TAE缓冲液至刚好没过凝胶（有样品孔的一端靠近负极）。

取15μlPCR产物与3μl的6×上样缓冲液混匀，加入到凝胶样品孔中。

每加完一个样品应更换一个吸头。

加样前，要记下加样的顺序。

在每排样品孔中留出一个位置加入5μl的marker。

加样后的凝胶板立即通电进行电泳，电压100V，样品由负极向正极移动。

当溴酚蓝移动到距离凝胶下缘约1/3时，停止电泳。

电泳完毕后，取出凝胶，采用凝胶成像系统拍照保存。

三、实验小结（一）实验结果PCR 产物电泳结果由上图可以看出，样品1和样品6出现了目的条带（大小约20bp），所以DNA模板1为猪肉DNA，DNA模板3为牛肉DNA,DNA模板2为兔肉DNA。

（二）实验讨论1.在加入Taq酶时，应始终保持酶在冰浴中，不可握在手中。

2.每加完一次酶，都应更换吸头。

因为在加酶时，吸头会插入液面以下，为防止污染，应更换吸头。

3.拔出梳子时，应两端一起用力，垂直，缓慢地拔出，以免破坏胶孔。

4.将样品与上样缓冲液混合时，要反复吸进，挤出溶液。

为防止出现较多气泡，在每次挤出溶液时，可在吸头中残留少量溶液。

5.在加样时，吸头要垂直于凝胶板且不要插入太深，以免破坏样品孔。

6.我们组的电泳图中，条带不是很明显，应该是加样时样品的量不够充足，以后应注意。

篇二：PCR实验报告pcr实验报告7月19日高遄实验目的：了解pcr技术原理，掌握最基础的pcr实验步骤。

实验试剂：模板dna，mg2+，buffer，dntps，taq dna聚合酶，引物，h2o，石蜡油。

实验原理：? pcr全称聚合酶链反应，是体外快速扩增特定基因或dna序列最常用的方法。

? 基本原理：首先将双链dna分子在临近沸点的温度下加热分离成2条单链dna分子，dna聚合酶以单链dna为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸合成新的dna互补链。

pcr反应时，只要在试管内加入模板dna、pcr引物、四种核苷酸及适当浓度的mg2+，dna聚合酶就能在数小时内将目标序列扩增100万倍以上。

（1）双链模板dna分子首先在高温下解开成长的单链，短链引物分子立即与该模板dna两端的特定序列相结合，产生双链区。

（2） dna聚合酶从引物处开始复制其互补链，迅速产生与目标序列完全相同的复制品。

（3）在后续反应中，无论是起始模板dna还是经复制的杂合dna双链，都会在高温下解开成为单链，体系中的引物分子再次与其互补序列相结合，聚合酶也再度复制模板dna。

（4）由于在pcr反应中选用的一对引物，是按照与扩增区域两端序列彼此互补的原则设计的，因此每一条新生链的合成都是从引物的退火结合位点开始并朝反方向延伸的，每一条新合成的dna链上都有新的引物结合位点。

（5）整个pcr的反应全过程，即dna解链（变性）、引物与模板dna结合（退火）、dna合成（链的延伸）三步可以被不断重复。

经多次循环之后，反应混合物中所含有的双链dna分子数，即两条引物结合位点之间的dna区段的拷贝数，理论上的最高值应该是2^n，能进一步满足遗传分析的需要。

? 试剂作用：（1）引物：dna复制的起始点，针对复制dna片段的两端，有5’引物和3’引物（2） taq dna聚合酶：促进dntps与模板结合。

（3） buffer：tris-hcl反应缓冲液，taq dna聚合酶提供一个最适酶催反应条件。

（4） mg2+：对pcr扩增效率影响很大，浓度过高可降低pcr扩增的特异性，浓度过低则影响pcr扩增产量甚至使pcr扩增失败而不出扩增条带。

（5） dntps：底物，在引物引导下合成与模板互补的dna新链。

（6）石蜡油：防止pcr加热过程中dna蒸发。

? 试剂配置体积：（1）热启动：94℃，5~10min（2）变性：94℃，45~60s。

（3）退火：50~65℃，1min。

退火温度计算：tm-（5℃~10℃），tm（解链温度）=4（g+c）+2（a+t）。

（4）延伸：72℃，1~1.5min。

（5）步骤（2）~（4）热循环25~30个周期（6）保温：延伸72℃，10min? 产物检测：凝胶电泳。

实验步骤：（1）设计20μl体系各试剂配比：（2）按照预先设计的20μl体积配置6管试管量，实际加入量如下表（3）完成后分6管加入pcr管中，每管15μl体积，标注1-6号码。

（4）在前1-~4号pcr管中加入模板dna，在5号管中加入c3h模板作为阳性参照，6号中不加任何模板dna，作为阴性参照。

（5）在加完模板的6管试剂中各加入20μl石蜡油（6）将pcr管放入 pcr仪，按之前设定的加热温度与时间设置a．热启动：94℃，2min；80℃，1min；此时在各管中加入dntps 4μlb．变性：94℃，30s；c．退火：65℃，1.5min；d．延伸：72℃，2min步骤b~d循环40次e．保温：72℃，10min（7）完成后用3琼脂糖凝胶（60ml）电泳进行检测。

实验结果：pcr目标产物约为295bp琼脂糖凝胶电泳结果如下图所示1 2 3 4 5 6marker1、2号泳道为♂性小鼠dna模板的pcr产物 3、4号泳道为♀性小鼠dna模板的pcr产物 5号泳道为c3h阳性参照6号泳道为阴性参照由marker参照可知，pcr产物大小约为290~300bp篇二：聚合酶链式反应pcr实验报告实验二聚合酶链式反应（pcr）一、实验原理聚合酶链式反应（pcr）是利用dna片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速扩增特异dna片段的技术。

它应用热稳定的聚合酶，通过双链dna模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，dna片段以指数方式增加了百万倍。

从非常微量的dna甚至单个细胞所含有的dna起始，可产生ug量的pcr产物。

二、器材与试剂1.器材：移液器，ep管，热盖pcr仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪2.试剂：引物，模板，taq dna聚合酶，原料（dntps），缓冲液与mg2+，h2o, 2pcrmi溶液，dna染料三、实验步骤pcr反应体系的建立取离心管，依次加入试剂混匀1．h2o 12μl2．模板1μl3．引物t7 1μl4．引物sp61μl5．2pcrmi15μlpcr仪的热循环反应把离心管放入pcr仪中，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成1.模板dna的变性：模板dna经加热至94℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2.模板dna与引物的退火(复性)：模板dna经加热变性成单链后，温度降至56℃左右，引物与模板dna单链的互补序列配对结合；3.引物的延伸：经加热至72℃左右dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链。

重复该循环30次，每次需要2-3分钟。

电泳检测结果扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中，电泳结束后，放到紫外照射仪中进行透射，电泳明胶显示清晰的条带，如下图所示加入的为1号样，出现在500bp左右条带，而预算结果为扩增出492bp条带，故实验成功。

四、讨论1.mg2+离子浓度对pcr扩增效率影响很大，浓度过高可降低pcr扩增的特异性浓度过低则影响pcr扩增产量甚至使pcr扩增失败而不出扩增条带。

2.变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低pcr扩增效率。

3.eb：溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖中的dna，可与dna结合，用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号。

4.溴酚蓝：电泳指示剂，相当于300bp的dna的电泳速度。

5.100bp dna markerⅰ是由单独的pcr扩增产物混合而成，已含有1loading buffer,可以直接电泳。

包括11条双链dna片断：100bp、20bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、800bp、900bp、1000bp和1500bp。