单克隆抗体 一个B淋巴细胞：只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞：能无限增殖
融合 杂交瘤细胞 培养
单克隆抗体
经免疫的小鼠
提取
B淋巴细胞
小鼠骨髓瘤细胞
灭活的病毒等手段
杂交 细胞
用特定的选 择性培养基
第一次筛选
杂交瘤细胞 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件 下能无限增殖的杂交瘤细胞
注射到小鼠腹腔
体外培养
1.动物细胞融合的目的中最重要的是----------------（ B A.克服远缘杂交不亲和 C.培育新品种 B. 制备单克隆抗体 D.生产杂种细胞
）
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是 （ ）
A. 诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同
D
C. 所采用的原理完全相同
D. 都能形成杂种细胞
原
理
细胞膜的流动性 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学、 生物方法 主要用于制备 单克隆抗体
融合前处理
诱 导方法
用
途
提 问
1.抗体由何种细胞产生？ 2.抗体主要分布在哪里？
？
3.如何得到抗体？
常规抗体制备 ①向动物体内反复注射抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分 离所需抗体。 ②特点：产量低、特异性差、纯度低、反应不够灵敏
3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是------（ D A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成
）
D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成
(06江苏)下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。
动物细胞培养 （1）_______________技术是单克隆抗体技术的基础。 （2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于________培养基。 选择 特异性强,灵敏度高 （3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是________________。 （4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采 用________________。 灭活的病毒 在体外大量增殖 （5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_______________特点，又具备淋巴 细胞的_______________特点。 分泌特异性抗体 骨髓 造血干细胞 （6）淋巴细胞是由动物体_________中的______________细胞分化、发育而来。 （7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____________。 主动运输
提取单克隆抗体
细胞融合后培养液中有几种细胞? B BB B瘤 瘤瘤 瘤
筛选杂种 细胞 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途 径能被氨基嘌呤阻断。B淋巴细胞中有这两条 DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤 细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖。
单克隆抗体的应用：
⑴在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性 强、纯度高、灵敏度高、产量大、容易标准化 生产等优点。 ⑵单克隆抗体可以作为载体，运载抗癌药物， 形成“生物导弹”，治疗恶性肿瘤。
1 方法：
物理法
诱导方式
化学法 生物法： 灭活的病毒 丧失感染性（不感染细胞）
仙台病毒
紫外线 保留融合活性 （诱导细胞融合）
2.方法：
灭活பைடு நூலகம்病毒颗粒黏附于细胞表面
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性）
总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 物理、化学方法 获得部分 或完整植株 动物细胞融合