生物特性：
无细胞壁，形态呈高度多形性，可为圆形、丝状或梨形，其直径仅有 0.13～0.18μm，是目前发现的最小细胞，并且变形能力大，故能通过滤菌 器。 革兰氏染色不易着色或呈阴性。 胞膜中含有胆固醇或其他甾醇，这种特性使支原体膜更具柔顺性，对于物 理因素，如压力、渗透压、脱水的抵抗力很大。 多数支原体适合在偏碱性条件下生存（pH值7.6~8.0），对酸耐受性差。
原体是没有作用的。
支原体污染应对策略
新一代支原体抗生素M-Plasmocin 其含有两种杀菌成分,一种成分通过干扰核糖体的翻译功能而使蛋白合 成受阻。另一种成分则通过干扰复制叉的形成而阻止DNA的复制。 可以强效对抗支原体及相关的无胞前对抗支原体最理想的 方法。
支原体污染来源
工作环境的污染
操作者本身的污染（包括操作者操作不当以及某些支原 体在人体是正常菌群） 实验器材的污染 培养基等试剂的污染
被污染细胞造成的交叉污染
制备细胞的原始组织或器官的污染
支原体污染的类型
口腔支原体(M.orale) 精氨酸支原体(M.arginini) 猪鼻支原体(M. hyorhinis) 发酵支原体(M.fermentans)
梨支原体(M. pirum)
莱氏无胆甾原体(idlawi）
支原体污染有时易被忽视！
1.培养液可不发生混浊
2.细胞病理变化轻微或不显著
3.细微变化也可由于传代，换液而缓解。 4.个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从 培养器皿脱落
但支原体污染对细胞的影响却是极大的！！！
1、影响细胞的生长状态及形态 支原体可使培液中支持细胞生长的营养物质含量减少，造成细胞生长缓慢甚至 停止；另外还会导致细胞微管解聚，引起细胞一系列病变，表现为细胞收缩、 贴壁细胞脱落、裂解等。
些重要实验室的经验。一旦发现已经污染支原体的 培养物,灭活后弃之。更换新的培养物。避免支原体的进一 步播散。
3、其他 此外，支原体污染还会影响一些病毒在细胞中的产量、使恶性细胞致癌能力下降、 影响淋巴细胞分化等。
支原体污染的检测方法
培养法 DNA荧光染色法 聚合酶链反应(PCR)法 电子显微镜法 相差显微镜检测
3-H胸腺嘧啶掺入法
酶联免疫吸附试验、免疫荧光法 低张处理地衣红染色观察
培养法：
原理：利用营养丰富的培养基,直接对待检细胞、血清等进 行支原体培养。 局限性：灵敏度低，试验周期长，不能检测到种且不适用于 检测所有支原体
细胞培养中的支原体污染
支原体简介
概念：支原体又称“霉形体”，是目前已知一类能在无生
命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。自然界分 布广泛，种类多，有80余种，分为两个属：一为支原体属 （Mycoplasma），有几十个种；另一为脲原体属 （Ureaplasma），仅有一种。与人类感染有关的主要是肺炎 支原体和解脲脲原体。
支原体集落呈“油煎蛋”形
DNA荧光染色法
原理：利用荧光Hoechst33258标记细胞和支原体DNA,在紫外光 (波长为630 nm)激发下产生黄绿色荧光,利用荧光显微镜观察 支原体是否存在。 局限性：有时易出现假阴性和假阳性。
聚合酶链反应（PCR）法
原理：通过扩增被检测标本中的支原体DNA ,再进行琼脂糖 凝胶电泳。电泳完毕,将电泳胶在紫外投射仪下观察,根据标 准分子量及阳性对照、内对照条带,观察待测样品中是否有 阳性条带。
支原体对热抵抗力差，通常55℃经15分钟处理可使之灭活。
对影响细胞壁合成的抗生素不敏感，但红霉素、四环素、链霉素及氯霉素 等作用于支原体核蛋白体的抗生素，可抑制或影响蛋白质合成，有杀灭支
原体的作用。
支原体高污染率
国内外研究表明，在细胞培养中，支原体感 染率达到30%-60%
支原体污染已成为世界问题！
支原体污染应对策略
细胞一旦发生了支原体污染,应当弃之。虽然已有了针对支
原体的抗生素及最近出现的所谓支原体清除剂,这些方法只能
杀灭细胞外的支原体。 除非是不可替代或无法重新获得的细胞，一般没有必要进行 支原体清除工作。
常用方法有：抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理等等。 要注意的是：支原体没有细胞壁，故作用于细胞壁生物合成的抗生素，如内酰胺 类、万古霉素等是不敏感的；对多粘菌素、利福平、磺胺药物普遍耐火药。对支 原体最有抑制活性抗生素是四环素类、大环内酯类等，氨基糖苷类、氯霉素对支 原体有较小的抑制作用。必要时更换所有培养用物。通常，滤过除菌的方法对支
支原体污染的细胞
经M-Plasmocin处理 过的细胞
支原体污染应对策略
1、从可靠来源引进、使用细胞,特别是知名的信誉良好 的专门机构,如ATCC、基础医学细胞中心等。 2、预防为主:细胞培养实验室应制定严格的管理制度, 按照规范的实验程序操作。
3、定期对实验室中的培养物进行支原体检测。这也是国外一
2、影响细胞的代谢和功能 （1）培液中的精氨酸被支原体大量消耗，引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的 合成障碍； （2）支原体活动使培液成分发生改变（如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质）， 影响细胞代谢。 （3）支原体吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，影响细胞信号传递； （4）支原体消耗细胞的核苷库—染色体异常