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第一节 基本原理
（三）影响荧光强度的外界因素

温度


溶剂
溶液酸碱性


荧光熄灭剂
散射光
激发光源
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第一节 基本原理
（四）荧光分光光度计
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出 的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发 射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏
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◆能力要求 掌握荧光分光光度计的基本结构及仪器的基本操作 方法，学会使用荧光分光光度计对药物进行分析的 操作技术。
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第一节 荧光分光光度法的基本原理
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第一节 基本原理
任何荧光物质都具有两个特征光谱：
激发光谱和荧光光谱（发射光谱）
激发光谱是当荧光波长一定时，荧光强度随激发光
波长而变化的关系曲线（以激发光波长λex为横坐标
，荧光的发光强度F为纵坐标的光谱）。
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第一节 基本原理
荧光光谱是当使激发光波长和强度不变，而让物质 所产生的荧光通过发射分光系统 ( II )分光，测定每 一发射波长荧光强度F，以发射光波长λem为横坐标 ，荧光的发光强度F为纵坐标作图所得的关系曲线。
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具有强的可见-紫外吸收，即具有K带强吸收 具有高的荧光效率
发射荧光的量子数 荧光效率 F 吸收激发光的量子数
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第一节 基本原理
（二）分子结构与荧光的关系

大的共轭π键结构 λex（激发） λem（激发） φF
苯
萘
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第一节 基本原理
（二）磷光的产生 电子由激发三重态→基态单重态的跃迁
课堂互动
您能比较荧光和磷光的主要区别吗？
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第一节 基本原理
二、激发光谱和荧光光谱（发射光谱）
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286
278
321
0.11
0.29
蒽
四苯
365
390
400
480
0.46
0.60
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第一节 基本原理

分子的刚性和共平面性
联苯φF =0.18

芴F=1.0
取代基的影响
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第一节 基本原理
（二）荧光分光光度计的基本结构
1.光源 2. 4. 7. 9. 狭缝 3. 激发单色器 5. 样品池 6. 表面吸光物质 8. 发射单色器 10. 检测器 11. 放大器 12. 指示器 13. 记录器
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◆学习目的
通过学习荧光分析法的基本原理，产生荧光的条件以 及荧光光谱特征和用途，加深对荧光分析的依据、条 件和应用的理解，并能选择荧光物质的激发波长和荧 光波长进行分析。为学习药物分析、天然药物化学等 专业课程奠定基础。
第一节 基本原理
溶液荧光光谱具有如 下特征：
斯托克斯位移
荧光光谱系
蒽的激发光谱（虚）和荧光光谱（实）
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第一节 基本原理
三、荧光与分子结构
（一）荧光物质的特征

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第一节 基本原理
课堂互动 请您比较荧光分光光度计与紫外-可见分光 光度计的主要区别
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第一节 基本原理
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第一节 基本原理


光源
目前最常用的是氙灯
单色器（分光系统）
激发单色器

发射单色器
样品池 测定荧光用的样品池必须用低荧光材料或石英

检测器
光电倍增管
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第一节 基本原理
（三）仪器校准

灵敏度校准


波长校准
激发光谱和发射光谱校准
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◆知识要求
熟悉掌握荧光和磷光产生的原理和特点及区别；激 发光谱与荧光光谱的概念及用途；溶液荧光光谱的 特征；产生荧光的条件；荧光定量分析的依据、条 件和方法。了解。 了解影响荧光强度的因素，荧光分析仪器及其与紫 外-可见分光光度计的区别，荧光分析新技术在分析 中的应用。
振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和
结构情况。
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第一节 基本原理
（一）仪器类型

滤光片荧光计 滤光片-单色器荧光计 荧光分光光度计
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某些物质吸收紫外 - 可见光后，可以发射其波长比 吸收光更长的光，并且随照射光的消失而消失，这 种发射光称为荧光（fluorescence）。 荧光分析法（fluorometry）是利用某些物质发射荧 光的特性进行定性、定量分析的光学分析方法，又 称荧光光谱法
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第一节 基本原理
一、荧光的产生过程 （一）单重态与三重态 A 单重基态 B 激发单重态 C 激发三重态
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第一节 基本原理
（二）荧光的产生 电子由激发单重态 →基态单重态的跃 迁
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