DAPI染色
1．原理DAPI为4’，6二脒基-2-苯吲哚(4’，6—diamidino-2—phenylindole)能与双链DNA小槽，特别是AT碱基结合，也可插入少于3个连续AT碱基对的DNA序列中。

当它与双链DNA结合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA结合则无荧光增强现象，因此是一种简易、快速和敏感地检测DNA的方法。

DAPI的荧光强度虽较Hoechst低，但荧光稳定性优于Hoechst；其特异性较溴化乙啶(ethidlium bromide，EB)和碘化丙啶(propidium iodide，P1)高。

2．溶液配制
(1)0．01mol／L PBS(pH7．0)：取0．1mol／L NaH2PO4·H2O 34ml、0．1mol／LNa2HPO4 66ml、NaCl 0．9g，溶于900m1双蒸水；
(2)DAPI储存液：将0．5mgDAPI溶于5．0ml PBS中，分装，低温长期保存；
(3)DAPI工作液：用PBS稀释DAPI储存液，终浓度为0．1ug／ml。

3．染色程序
(1)培养的单层细胞(未固定)或新鲜组织的冰冻切片等，PBS漂洗5分钟；
(2)DAPI工作液室温染色5～20分钟(可根据实验材料的染色结果而定)；
(3)PBS漂洗；
(4)水溶性封片剂封片，游离细胞也可直接用含DAPI的PBS封片；
(5)荧光显微镜观察。

结果：正常的细胞核呈强荧光，细胞质无荧光；固定的组织细胞同样处理，亦可得到相似的染色结果。

在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光，在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters)，腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。

DAPI
分子式C16H17Cl2N5 分子量350.25 性质 1. 外观黄色粉末2. 纯度≥95%
HPLC
3. 产品描述DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。

和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。

和EB ethidium bromide相比对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。

DAPI染色常用于细胞凋亡检测染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。

DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。

因为DAPI 是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。

尽管DAPI不能通过活细胞膜但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。

DAPI具有很高的光漂白承受水平能用来检测酵母线粒体DNA叶绿体DNA病毒DNA microplasm DNA以及染色体DNA。

DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。

4. 染色过程
1用1mLddH2O将DAPI溶解制得2.9mM的DAPI溶液1mgDAPI/1mL H2O。

注DAPI不能直接用PBS等缓冲溶液溶解需要先用水将其溶解。

2取适量DAPI水溶液加到PBS中制备成10~50µM的DAPI溶液。

推荐以下PBS的配制方法将8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na2HPO4·12H2O、0.2g KH2PO4溶解于1L纯水中。

3将1/10培养基体积的DAPI溶液加入到细胞培养基中。

也可以用1/10浓度的DAPI缓冲液代替培养基。

4在37℃培养细胞10~20分钟。

5用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

6用带有360nm激发波长460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

储存条件-20℃避光保存
注意事项DAPI对人体有一定刺激性请注意适当防护。

荧光染料都存在淬灭的问题建议染色后尽量当天完成检测。

为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液
DAPI保存放在4℃保存。

DAPI配制使用无菌三蒸水溶解可以将10mgDAPI溶解在10ml水中使用冻存管分装每一管1ml20℃冻存。

使用的时候先取一管放在4℃。

染色把培养皿中的培养基换一次液每一个皿中放4-8ml培养基使用微量加样器加DAPI到培养皿中。

浓度50ug/ml,也就是4ml培养基对0.2ml DAPI工作液注意避光无菌操作。

移植前使用PBS洗6遍使用DMEM混悬每一皿细胞混悬在1mlDMEM中放在1ml管中备用。

染色可以2小时或者移植前一天染色都可以。