纤维含量的测定
高峻凤主编.植物生理学实验指导.高等教育出版社，2006,12:144-148
一：原理:
植物组织中的还原糖,蔗糖在80%的乙醇溶液中溶解,而淀粉及大部分蛋白质沉淀,当用4.6mol.L-1高氯酸（HClO4）溶解淀粉后，也可使蛋白质，纤维素等沉淀，再以0.1mol.L-1NaOH溶解蛋白质，热水和丙酮除去果胶和脂质后，剩余的沉淀可用于纤维素含量的测定。

糖与浓硫酸作用脱水生成糠醛，可与蒽酮缩合生成蓝绿色物质。

在620nm有最大吸收，而在10-100μg颜色与糖含量成正比。

用于己酮糖和己醛糖测定。

二：仪器：
离心机，分析天平，三用水浴，容量瓶，10ml离心管，铝试管架，分光光度计，沸水浴，移液管，15-25ml具塞刻度管8支，18*180mm试管12支试剂：
80%乙醇溶液，9.2 mol.L-1及4.6 mol.L-1高氯酸，0.1 mol.L-1NaOH溶液，60%H2SO4,
葡萄糖标准液：称取分析纯葡萄糖（80℃烘干）100mg，溶于蒸馏水中，定容至100ml,即1mg .L-1标准溶液，用时稀释10倍，即为100μg.L-1标准液蒽酮-硫酸试剂：称取0.2g蒽酮，和0.1g硫脲置烧杯中，缓缓加入100ml 浓硫酸，搅拌溶解后应呈淡黄的透明溶液。

3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：精确称量1g3,5-二硝基水杨酸（DNS）,溶于20ml2 mol.L-1NaOH溶液中，加入50ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钠，溶解后用蒸馏水定容至100ml
纤维素标准液：准确称量100mg，在冰浴下加入60-70ml预冷的60%硫酸，在0-2℃水解12h，然后用60%硫酸稀释至100ml刻度，摇匀。

将此液在冰浴下稀释10倍，即为100μg.ml-1之标准液。

三：材料：新鲜组织
四：方法步骤：
1，提取分离
（1）称取植物干样0.500g于10ml离心管中，加入5-6ml80%乙醇溶液，80℃水浴30min，期间不时搅拌。

用少量80%乙醇冲洗玻璃棒，并将
溶液冷却至室温后3500g下离心10min，上清液转入25ml容量瓶中，
再向沉淀中加入5-6ml80%乙醇，如上述重复浸提2次，将上清液合
并于25ml容量瓶中，并定容至刻度。

该提取液御用测定还原糖和可
溶性糖。

（2）向沉淀中加入2ml蒸馏水，在沸水中浴中糊化15min，冷却后加入2ml9.2mol.L-1。

HclO4，搅拌15min后，加蒸馏水4ml，混匀，在4000g
下离心10min，上清液转入50ml容量瓶。

再向沉淀中加入
2ml4.6mol.L-1HClO4，搅拌提取15min，加入5min蒸馏水，混匀后
离心10min，合并上清液，用蒸馏水洗沉淀2次，每次5ml，合并上
清液并用蒸馏水定容至刻度，该提取液用于测定淀粉。

沉淀用于纤维
素的测定。

（3）依次用0.1mol.L-1NaOH溶液，热蒸馏水和丙酮各洗沉淀2次，以除去蛋白质，果胶和脂质杂质。

每次洗15min，溶剂用量5ml,,离心后弃
去上清液，沉淀用于纤维素含量测定。

（4）向洗涤后的沉淀中加入5ml60%的硫酸，搅拌后置4℃冰箱中冷水解12h以上，取出后于4000g下离心15min，上清液转入25ml容量瓶中，再向沉淀中加入5ml60%的硫酸，重复提取2次，每次15min，上清液
转入25ml容量瓶中，并用60%硫酸定容至刻度，用于粗纤维含量测
定。

2.纤维含量的测定：
（1）蒽酮-硫酸法：按下表加入各种试剂并制作标准曲线.
试剂
试管号
1 2 3 4 5 6
100μg.ml-1
纤维素标
准液/ml
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水/ml 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0
蒽酮-硫酸
试剂/ml
5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
纤维素含
量/μg
0 20 40 60 80 100
以上标准管加完试剂后，先不摇动，再吸取2ml水解液，放入另一试管中，待全部加完蒽酮硫酸试剂后摇动混合。

将以上标准管和样品管同时放入100℃水浴中加热10min，取出后用自来水冷却至室温后测定620nm波长下吸光度。

以吸光度为纵坐标，糖浓度为横坐标，绘制标准曲线。

（2）样品含量测定：取上述纤维素提取液于2ml25mm*180mm大试管中，与标准管同法测定。

纤维素含量=C*Vt/W*Vs*1000 * 100%
C:标准曲线上纤维素含量（μg）Vt: 样品提取液总体积Vs（ml）：测定时取样体积(ml)；W：样品干重（mg）。