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七、讨论与思考： 1. 用标准曲线法进行定量的优缺点是什么？ 优点：操作简单、计算简便，不需要知道所有组分的相对校正因子，可直接从标 准工作曲线上读出含量，因此特别适合于大量样品的分析。其准确度取决于进样量的 准确性和重现性，以及操作条件的稳定性。 缺点： 标准曲线法一般适用于已知样品的基本成分和标准溶液的基本成分相接近 的样品，对于未知样品基本成分情况，不能使用该方法。而且对进样量的准确性、重 现性以及操作条件的稳定性有一定的要求。而每次样品分析的色谱条件（检测器的响 应性能，柱温，流动相流速及组成，进样量，柱效等）很难完全相同，因此容易出现 较大误差。此外，标准工作曲线绘制时，一般使用欲测组分的标准样品（或已知准确 含量的样品），而实际样品的组成却千差万别，因此必将给测量带来一定的误差。 2.试说明乙酰水杨酸在本实验的色谱柱上是强保留还是弱保留？为什么 ？ 答：弱保留。因为在这个实验中， C 18 色谱柱是高效反相液相色谱柱，亲水 性化合物的保留强，而乙酰水杨酸具有疏水性，所以乙酰水杨酸在本实验的色 谱柱上是弱保留。 八、参考文献 [1] 刘梅等. 固相萃取-液相色谱-串联质谱法检测食品中的三聚氰胺. [J]. 化学分析计 量, 2008, 17(2): 48-50. [2] 陈再洁等. 高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺含量. [3] 柳菡等. 液相色谱-串联质谱法检测奶和奶制品中三聚氰胺残留. [4] Gopalakrishnan Venkatasami and John R. Sowa Jr. A rapid, acetonitrile - free, HPLC method for determination of melamine in infant formula. [J]. Analytica Chimica Acta, 2010, 665(2): 227-230. [5]. Huang-Hao Yang et al. Molecularly imprinted polymer as SPE sorbent extraction of melamine in dairy products. [J]. Talanta, 2009, 80(2): 821-825.
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20μ L,二次进样，以浓度 C(μ g/mL)对应二次测定峰面积平均值 A 制作工作曲线， 并进行回归分析,得回归方程。 6、样品测定：将样品溶液用 0.45μ m 的微孔滤膜过滤，进样 20μ L,分别进样二次， 用回归方程计算阿司匹林肠溶片中阿司匹林含量。 五、数据记录及处理 1.数据记录 C(ppm) 0 25 50 125 250 C 样品 2. 标准曲线的绘制： 根据上表数据，以浓度(C)为横坐标，峰面积(A 平均)为纵坐标作图，得到标准曲线 如下图： A1 0 177 325.9 796.9 1608.1 672.1 A2 0 165.4 328.6 803.1 1609.9 665.7 A 平均 0 171.2 327.25 800 1609 668.9
高效液相色谱法测定复方阿司匹林中有效成分
一、实验目的 1、掌握复方阿司匹林中有效成分的高效液相色谱分析方法； 2、培养综合知识的运用能力。 二、实验原理 阿司匹林是一种历史悠久、应用广泛是退烧药物。其主要成分是乙酰水杨 酸，片剂中乙酰水杨酸的含量既是药物质量的主要指标，也是医生处方的重要 依据。为了控制其含量，必须对产品进行严格的纯度检验。 本实验采用乙酰水杨酸纯品来进行定性。找出 复方阿司匹林中有效成分乙酰 水杨酸在图谱中的位置，然后以乙酰水杨酸标准溶液制作工作曲线。从工作曲 线中查找并计算出复方阿司匹林中乙酰水杨酸的含量。 三、仪器及药品 实验仪器： 1100 型高效液相色谱仪、 二极管阵列检测器、 色谱工作站、 色谱柱： Aglient C18（4.6mm×250mm） 、100μ L 微量注射器、电子分析天平、超声波清洗器、烧杯、容 量瓶、吸量管等。 实验试剂：乙酰水杨酸标准品，甲醇、乙腈均为色谱纯，水为超 纯水等。 四、操作步骤 1、标准溶液溶液配制：准确称取阿司匹林标准 50mg 置 100mL 烧杯中，加 50 mL 乙腈， 超声使溶解,定量转入 100mL 容量瓶中,用乙腈稀释至刻度摇匀,得 500μ g/mL 阿司 匹林标准溶液。500μ g/mL 阿司匹林标准溶液 0. 5、1. 0、2. 5、5. 0 mL 置 10 mL 容量瓶中,加乙腈稀释至刻度摇匀,得浓度分别为 25、50、125、250μ g/mL 阿司匹 林标准溶液。 2、样品溶液配制：取 10 片阿司匹林肠溶片,研细,到入 250mL 烧杯加入 100 mL 乙腈, 超声处理 20 min 溶解, 定量转入 250mL 容量瓶中,用乙腈稀释至刻度摇匀。吸取 上述上层清液 1.00mL 于 10mL 容量瓶中用乙腈稀释至刻度摇匀。 3、1% 冰醋酸溶液溶液配制：用移业液枪移取 10mL 冰醋酸加入 1000mL 试剂瓶中，用 超纯水稀至 1000mL 摇匀。 4、液相色谱分离条件： C 18 色谱柱；流动相：甲醇： 1% 冰醋酸溶液（ 50 ∶ 50 ） ； 流速： 1.0 ml/min ；检测波长： 276 nm ；柱温： 30 ℃。 5、标准曲线制作：将浓度分别为 25、50、125、250μ g/mL 阿司匹林标准溶 1500 y = 6.4104x + 4.558 R 2 = 0.9999
峰面积
1000 500 0 0 50 100 150 200 250 300
浓度（ppm)
六、结果讨论 将 所 测 的 阿 司 匹 林 样 品 的 平 均 峰 面 积 Ax=668.9 代 入 线 性 回 归 方 程 y=6.4104x+4.558 中，计算得到 x=103.635ppm。R2=0.9999，说明标准曲线线性关系良 好，测试准确性较高。