１］ 。Ｆ 与血清白蛋白 织［ Ｆ Ａ 是 甘 油 三 酯 的 水 解 产 物，
） 课题来源 ： 国家自然科学基金资助项目 （ 编号 ： ８ １ ２ ７ １ ９ １ ９ 医学硕士生 ， 作者简介 ： 熊辉 ， 男， 主要从事动脉粥样硬化性疾病的研究 ０ １ ９ ８ －， 副教授 ， 主要从事脂代谢与相关疾病的研究 医学硕士 ， 通信作者 ： 胡汉宁 ， 男， ２ ９ ６ １ －，
摘要 目的 ： 探讨高效液相色谱法 （ 与酶 法 检 测 血 清 游 离 脂 肪 酸 （ 收取 ＨＰ Ｌ Ｃ） Ｆ Ｆ Ａ）的 结 果 有 无 差 异 。 方 法 ： ， 武汉大学 中 南 医 院 ９ 分离新鲜血清， 采用全自动生化分析仪酶法测定血清 Ｆ ２名健康体检者空腹外周血３ｍ ｌ Ｆ Ａ 水平 ， 为 内 标， 改良 Ｄ 酶法检测血清 同时以正十七酸 （ １ ７∶０） ｏ ｌ ｅ ｓ法 萃 取 血 清 Ｆ Ｆ Ａ， ＨＰ Ｌ Ｃ 法 定 量 检 测 。结 果 ： Ｃ （ ） ／ （ ） ／ 两种 方 法 检 测 结 Ｆ Ｆ Ａ 结果为 ４ ６ ６． ５ ３ ４ ７． ３， ５ ８ ５． ３ ｍ ｏ ｌ Ｌ，ＨＰ Ｌ Ｃ法 Ｆ Ｆ Ａ 结果为 ４ ４ ８． ５ ３ ３ ９． ５， ５ ７ １． ９ ｍ ｏ ｌ Ｌ， μ μ ） ， ） 。 结论 ： 果无明显差异 （ 且具有良好的相关性 （ 酶法与 ＨＰ ０ ０ ３ ９ ４， ５ ９ ８ ０， ５ Ｌ Ｃ 法检测 Ｆ Ｆ Ａ ｔ ＝１． Ｐ＞０． ｒ＝０． Ｐ＜０． 结果一致性良好 。 酶法操作简单 ， 更适合临床实验室常规检测 。 关键词 高效液相色谱 ； 游离脂肪酸 ； 酶法 中图分类号 Ｒ ６． １ 文献标识码 Ａ ４ ４
Ｃ ｅ ｎ Ｆ ｏ ｒ Ｇ ｅ ｎ Ｄ ｉ ａ ｎ Ｚ ｈ ｏ Ｈ ｏ ｓ ｉ ｏ Ｗｕ ｈ Ｕ ｎ ｉ Ｗｕ ｈ ４ ３ ０ Ｃ ｈ ｉ ｔ ｅ ｒ ｅ ｏ ｓ ｉ ｓ， ｎ ｎ ａ ｎ ｔ ａ ｌ ａ ｎ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ａ ｎ ０ ７ １， ｎ ａ ｇ ｐ ｆ ｇ ｙ，
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： （ ｅ ｒ Ｏ ｂ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｘ ｌ ｏ ｒ ｅ ｗ ｈ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ｆ ｒ ｅ ｅ ｆ ａ ｔ ｔ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ Ｆ Ｆ Ａ） ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍ ｉ ｎ ｅ ｄ ｂ ｈ ｉ ｈ － ｐ ｐ ｙ ｙ ｇ ｊ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｈ ＨＰ Ｌ Ｃ）ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｏ ｆ ｅ ｎ ｚ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ． ｑ ｇ ｐ ｙ （ ｙ ：Ａ ， Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ ９ ２ｓ ｕ ｂ ｅ ｃ ｔ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｒ ｅ ｃ ｒ ｕ ｉ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｚ ｈ ｏ ｎ ｎ ａ ｎ Ｈ ｏ ｓ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｗｕ ｈ ａ ｎ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ３ ｊ ｇ ｐ ｙ ， ｍ ｌ ｆ ａ ｓ ｔ ｉ ｎ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ｓ ａ ｍ ｌ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｔ ａ ｋ ｅ ｎ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔ ｈ ｅ ａ ｒ ｔ ｉ ｃ ｉ ａ ｎ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ Ｆ Ｆ Ａ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｄ ｇ ｐ ｐ ｐ （ ） ｂ ｏ ｔ ｈ ｂ ａ ｕ ｔ ｏ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ａ ｎ ａ ｌ ｚ ｅ ｒ ｅ ｎ ｚ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ ＨＰ Ｌ Ｃ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ．Ｔ ｈ ｅ ｍ ｏ ｄ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｙ ｙ ｙ ， Ｄ ｏ ｌ ｅ ｓ Ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｆ ｒ ｅ ｅ ｆ ａ ｔ ｔ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ａ ｎ ｄ ｈ ｅ ｔ ａ ｄ ｅ ｃ ａ ｎ ｏ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ（ Ｃ １ ７∶０） ｙ ｐ ： ） ０ ｔ ＝１． Ｐ＞０． ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ａ ｓ ａ ｎ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｌ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ． Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｗ ａ ｓ ｎ ｏ ｓ ｉ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ（ ３ ９ ４， ５ ｇ ／ ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｏ ｆ ｅ ｎ ｚ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ（ ４ ６ ６． ５［ ３ ４ ７． ３， ５ ８ ５． ３］μ ｍ ｏ ｌ Ｌ） ａ ｎ ｄ ＨＰ Ｌ Ｃ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｙ （ ［ ， ］ ／ ） ， （ ， ４ ４ ８． ５３ ３ ９． ５５ ７ １． ９ μ ｍ ｏ ｌＬ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｓ ｔ ｒ ｏ ｎ ｌ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ＝０． ９ ８ ０ Ｐ＜ ｇ ｙ ） ： ０． ０ ５ ． Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｏ ｆ ｅ ｎ ｚ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ａ ｒ ｅ ｃ ｏ ｎ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ｗ ｉ ｔ ｈ ＨＰ Ｌ Ｃ． Ｅ ｎ ｚ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｙ ｙ ｉ ｓ ｓ ｉ ｍ ｌ ｅ ａ ｎ ｄ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｒ ｏ ｕ ｔ ｉ ｎ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ． ｐ ｙ ｇ ； ； Ｋ ｅ Ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ｉ ｈ Ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｎ ｃ ｅ Ｌ ｉ ｕ ｉ ｄ Ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｈ Ｆ ｒ ｅ ｅ Ｆ ａ ｔ ｔ Ａ ｃ ｉ ｄ ｓ Ｅ ｎ ｚ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ Ａ ｓ ｓ ａ Ｈ ｇ ｑ ｇ ｐ ｙ ｙ ｙ ｙ ｙ 硬脂酸和软 血清中含 量 最 多 的 脂 肪 酸 是 油 酸 、 脂酸 ， 它们占血清 总 含 量 的 ９ ０％ 以 上 。 血 清 中 游 离 ， 主要来源于脂肪组 脂肪酸 （ ｅ ｆ ａ ｔ ｔ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ Ｆ Ｆ Ａ） ｆ ｒ ｅ ｙ
同， 近年来研究发现 Ｆ Ｆ Ａ 水平升高既可增加胰岛素 抵抗又 可 引 起 高 胰 岛 素 血 症
［ ３］
。人体内高水平的
最终出现与２ 型糖 Ｆ Ｆ Ａ 可以直接损害胰 岛 β 细 胞 ， ［ ４］ 尿 病 相 似 的 β 细 胞 功 能 异 常 。 不 仅 如 此， 血清 糖 Ｆ Ｆ Ａ 的升高与心血管 疾 病 的 危 险 因 素 如 高 血 压 、 、 尿病等密切 相 关 。 目前测定血清 Ｆ 采用滴定法 Ｆ Ａ 比色法 、 原子分光光度法等 ， 但是这些方法操作繁琐 ， 精密度差 。 后来出现 的 气 相 色 谱 法 是 常 用 方 法 。 与 气相色谱法相比 ， 高效液相色谱 （ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｈ ｉ ｈ ｅ ｒ － ｑ ｇ ｐ ， ） 法具有更高的精密度和灵 ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｈ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ｇ ｐ ｙ
， ， ， ， ， ， Ｘ Ｉ Ｏ Ｎ Ｇ Ｈ ｕ ｉ Ｃ Ｈ Ｅ Ｎ Ｗ ｅ ｉ Ｌ Ｉ Ｕ Ｓ ｏ ｎ ｍ ｅ ｉ Ｌ Ｕ Ｏ Ｗ ａ ｎ ＭＡ Ｐ ｅ ｉ Ｌ Ｚ ｈ ｉ ｈ ｕ ａ ｇ ， ， Ｌ Ｉ Ｓ ｉ ｗ ｅ ｉ Ｔ Ｕ Ｊ ｉ ａ ｎ ｃ ｈ ｅ ｎ Ｚ Ｈ Ｏ Ｕ Ｘ ｉ ｎ， Ｈ Ｕ Ｈ ａ ｎ ｎ ｉ ｎ ｇ ｇ
第２期
熊 辉， 等． 高效液相色谱与酶法检测血清游离脂肪酸的对比分析
２ ７ ９
２］ 。 不同脂肪酸对 人 体 的 作 用 不 结合存在于血液中 ［
， 各Ｆ 积与内标峰面积之比为横坐标 （ Ｆ Ａ 浓度为纵 Ｘ） ， 进行回归分析 ， 坐标 （ 得到线性回归方程 。 Ｙ） １． ５ 精密 度 测 定 选 取 正 常 健 康 人 群 血 清 标 本 １ ／ ， 同时再选取脂肪酸浓度处于医 份（ ３μ ｍ ｏ ｌ Ｌ） ４ ２ ５． ／ ， 将每份标 学决定水平的 标 本 １ 份 （ ５μ ｍ ｏ ｌ Ｌ） ８ ７ ９． 本分 为 ２ 前 者 编 为 第 一 批 次， 后者编为第二批 ０ 份， ， 每 天 测 两 个 批 次， 每个批次 次 。 连续上样测定 ５ｄ 测４ 次， 计算批内相对标准差（ 和批间相对标 Ｒ Ｓ Ｄ） 。 准差 （ Ｒ Ｓ Ｄ） １． ６ 回收 率 测 定 选 取 正 常 健 康 人 群 血 清 标 本 １ 份， 分别加入高 、 中、 低 ３ 种浓度的混合 Ｆ Ｆ Ａ 标准品 溶液 ， 按前述步骤进行色谱分析 。 Ｓ １ ９． ０软件进行统计 １． ７ 统 计 学 分 析 使 用 Ｓ Ｐ Ｓ 学分析 。 两种 方 法 所 测 脂 肪 酸 结 果 经 正 态 性 检 验 ， 故 采 用 四 分 位 数 表 示。检 测 结 果 Ｆ Ｆ Ａ 呈偏态分布 ， 的比较采用配 对 样 本ｔ 检 验 ， Ｐ ＜０． ０ ５表示两种方 法检测差异有统计学意义 。
／ ： ０． １ ４ １ ８ ８ ． １ ６ ７ １ ２． ２ ０ １ ５． ０ ２． ０ ２ ５ Ｄ Ｏ Ｉ １ ８ ８ ５ － ｊ
高效液相色谱与酶法检测血清游离脂肪酸的对比分析
熊 辉 陈 薇 刘松梅 罗 婠 马 培 吕志华 黎四维 涂建成 周 新 胡汉宁 武汉大学中南医院基因诊断中心 湖北 武汉 ４ ０ ７ １ ３ ０
ｒ ｉ ｓ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ Ｆ ｒ ｅ ｅ Ｆ ａ ｔ ｔ Ａ ｃ ｉ ｄ ｓ Ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍ ｉ ｎ ｅ ｄ ｂ Ｈ ｉ ｈ Ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍ ａ ｎ ｃ ｅ Ｃ ｏ ｍ ａ ｙ ｙ ｇ ｐ Ｌ ｉ ｕ ｉ ｄ Ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｒ ａ ｈ ａ ｎ ｄ Ｅ ｎ ｚ ｍ ａ ｔ ｉ ｃ Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｑ ｇ ｐ ｙ ｙ 第３来自６卷 第２期 ５年３月 ２ ０ １