药材 枳壳
表 1 线性关系考察、精密l）
r
精密度
（ RSD / % ）
Y = 2． 17 × 103 X － 222 5． 08 ～ 254． 0 0． 9977 3． 8
2． 4． 2 方法专属性 取经预先测定，不含展青霉素的枳壳样 品，按照“2． 3”项下操作，制备空白供试品溶液； 同时在枳壳中 添加“2． 4． 1”项下贮备液 5 μl，按照“2． 3”项下操作，制备枳壳 加标供试品溶液。 试 验 结 果 表 明，枳 壳 中 其 它 成 分 不 干 扰 展 青霉素的测定 （ 色谱图见图 1） 。 2． 4． 3 加样回收率试验 取枳壳粉末（ 未检出展青霉素，过 二号筛） 各 2 g，分别一式 9 份，以 3 份为一组，分别精密加入每 1 ml 含 10 μg 展青霉素的对照品溶液 25 μl、50 μl、250 μl，分 别加水 40 ml，按“2． 4”项下制备加标高中低浓度的供试品溶 液，摇匀，进样分析，计算回收率，结果见表 2。
中国卫生检验杂志 2011 年 7 月 第 21 卷 第 7 期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Jul 2011； Vol 21 No 7
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【论著】
HPLC － MS /MS 法测定中药材枳壳中展青霉素
王少敏，郑荣，俞灵，陈静，季申，王柯*
目前展青霉素的方法多采用薄层色谱法［3］和高效液相色 谱法［4］，其中薄层色谱法准确性较差，高效液相色谱法易受到 糠醛类物质的干扰。由于中药材的基质复杂，90% 为固态物 质，更易受到杂质干扰，故采用专属性强的液相色谱 － 串联质 谱测定法对酸性果实类中药枳壳中展青霉素的展青霉素进行了 检测，并考察了方法学。结果表明，本法操作简单易行，灵敏度 高，专属性强，适用于测定酸性果实类中药材中展青霉素。
［Key words］ Patulin； HPLC － MS / MS； Zhike； Chinese herb
展青霉素（ Patulin） ，化学名 4 － 羟基 － 4 氢 － 吡喃 － 2 － 酮，是由展青霉、扩展霉、棒曲霉等霉菌产生的有害代谢产物， 具神经毒性，并 有 致 突 变 和 致 畸 作 用。 展 青 霉 素 主 要 存 在 于 水果及其制品中，因展青霉素分子小，易溶于水，热稳定性高， 在酸性溶液中较稳定，一般的加热，晾晒等中药加工炮制工艺 无法去除该霉素。中药中亦有许多水果或酸性果实类药材， 但目前展青霉素的检测主要集中在果汁等食品中［ 1 ～ 4］，中药 中相应检测未见 报 道。 为 了 保 证 中 药 安 全，我 们 急 需 建 立 中 药材中展青霉素的检测方法。
3 讨论 采用液相色谱法进行展青霉素的检测易受 5 － 羟甲基糠
醛的干扰，采用液 相 质 谱 联 用 检 测 法，利 用 分 子 量 不 同，采 用 MRM 技术，避免了 5 － 羟甲基糠醛的干扰，专属性强，灵敏度 高。
（ 上海市食品药品检验所，上海 201203）
［摘要］ 目的： 建立中药材枳壳中展青霉素的 HPLC － MS / MS 测定方法。方法： 样品经果胶酶酶解，用水提取、经过展青
霉素免疫亲和柱 净 化 后，用 高 效 液 相 色 谱 － 三 重 四 级 杆 串 联 质 谱 进 行 分 析 测 定。结 果： 展 青 霉 素 在 5． 08 ng / ml ～ 254． 0 ng / ml范围内与峰面积呈良好的 线 性 关 系，线 形 方 程 为 Y = 2． 17 × 103 X － 222，r = 0． 9977，回 收 率 在 80． 0% ～
2． 4． 4 重复性试验 因样品未检出展青霉素，采用加样方法 进行重复性试验。按“2． 4． 3 加样回收率试验”项下制备中浓 度加样枳壳供试品溶液，一式 6 份，进样分析，记录峰面积， RSD 为 6． 5% 。 2． 4． 5 稳定性试验 精密量取同一份高浓度回收率枳壳供 试品溶液，分别与 0 h、3 h、20 h、22 h 进样，测定峰面积，RSD 3． 5% 。试验结果表明，供试品溶液在 22 h 内稳定。 2． 4． 6 检出限 取枳壳低浓度加标供试品溶液进行分析，测 定信噪比，分别以信噪比为 3 与 10 时的量作为检出限与定量 限，结果检出限为 0． 02 μg·kg － 1 、0． 03 μg·kg － 1 ，定量限为 0． 1 μg·kg － 1 。 2． 4． 7 样品测定 按拟订方法测定枳壳中药材样品，结果未 检出展青霉素。
离子源为 ESI 源； 负离子模式检测； 扫描方式为多反应监
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测（ MRM） ； 电喷雾电压： 5500V； 离子源温度为 550℃ ，去簇电 压： － 45 伏。离子选择通道： m / z 153． 1 →109． 0 （ 定量） ，m / z 153． 1→80． 9（ 定性） ，两对离子对的碰撞能量分别为 － 11． 0v 和 － 15． 4v，离子流图见图 1。
由于展青霉 素 主 要 存 在 于 水 果 或 酸 性 果 实 中 ，因 此 选 择
［基金项目］ 国家科技重大专项课题项目（ 2009ZX0 9502 － 024） ［作者简介］ 王少敏（ 1978 － ） ，女，生药学硕士，主管药师，主要
从事中药质量控制研究。 * 通讯联系人，E － mail： wangke1994@ yahoo． com． cn
表 2 回收率试验
编号
加标值（ ng） 测得值（ ng） 回收率（ % ） 平均（ % ） RSD（ % ）
低添加水平 － 1 低添加水平 － 2 低添加水平 － 3 中添加水平 － 1 中添加水平 － 2 中添加水平 － 3 高添加水平 － 1 高添加水平 － 2 高添加水平 － 3
250 250 250 500 500 500 2500 2500 2500
中药材枳壳进行了试验。
1 材料与方法 1． 1 仪器与试剂 1． 1． 1 仪器 Agilent 1200 液相色谱 － API5500 三重四极杆 串联质谱 仪，高 速 均 质 器 （ 德 国 IKA，T25 digital ULTRA － TURRAX，转 速 采 用 12500 r / min ） ； 氮 气 吹 干 仪 （ N － EVAPTM112 型，美国 Organomation Associates，Inc 公司） 。 1． 1． 2 试剂 甲醇、乙腈（ 色谱纯） ； 展青/ 黄曲霉素多功能净化柱 （ Mycrosep228AlaPat，美国 VICAM 公司） ； 果胶酶（ 批号： 107K0671， SIGMA 公司） ； 枳壳（ 批号： y － 091020 产地： 浙江） ； 展青霉素标准 品（ 批号 34127，Fluka 公司） 。试验用水为超纯水。
101． 1% 之间。在枳壳中最低检测限为 0． 02 μg / kg。结论： 本法灵敏、快速、准确、专属性强，可用于中药枳壳中展青霉素
的测定。
［关键词］ 展青霉素； 高效液相色谱 － 串联三重四极杆质谱； 枳壳； 中药材
［中图分类号］ O657． 63
［文献标识码］ A
［文章编号］ 1004 － 8685（ 2011） 07 － 1593 － 02
2 方法和结果 2． 1 液相色谱条件
色谱柱： Phenomenex SB － C18，4 μm × 2． 0 × 5 cm。流动 相： A 为 乙 腈，B 为 5 mmol · L － 1 醋 酸 铵 水 溶 液，流 速： 0． 3 ml·min －1 ，梯度洗脱： 0 min ～ 3． 5 min，10% A →10% A； 3． 5 min ～ 3． 6 min，10% A→40% A； 3． 6 min ～ 4． 5 min，40% A→ 70% A； 4． 5 min ～ 4． 6 min，70% A→10% A。 2． 2 质谱条件
［Abstract］ Objective： To establish a HPLC － MS / MS method for determination of Patulin in zhike of Chinese herb． Methods： After being enzyme － hydrolyzed by pectinase，extracted by water，and purified by patulin immune affinity column，Patulin were analyzed by HPLC － triple quadrupole MS． Results： There is a good linear relationship within the range of 5． 08 ng·ml －1 ～ 254． 0 ng·ml －1 for Patulin，with the linear equation Y = 2． 17x103 X － 222，r = 0． 9977． The recovery was between 80． 0% ～ 101． 1% ． The LOD in Zhike was 0． 02 μg ·kg －1 in minimum． Conclusion： The method is sensitive，rapid，accurate and specific enough to determine Patulin in Zhike．
229． 87 252． 80 244． 53 424． 00 408． 00 418． 67 2055． 49 2001． 17 2055． 97
91． 9 101． 1 97． 8 84． 8 81． 6 83． 7 82． 2 80． 0 82． 2
96． 9 4． 8 83． 4 2． 0 81． 5 1． 6