大肠菌群的测定
－－注意事项


如何避免放小倒管时产生气泡（大肠菌群检测）？ 客户要求大肠菌群＜３／ml(g),请问如何检测和报 告？ 伊红美蓝是鉴别培养基，请问鉴别的原理是什么？
大肠菌群的测定



－－快速检测方法 LTSE快速检测法： 纸片快速法 TTC（氯化三苯四氮唑）显色快速法 DC（去氧胆酸钠）半固体试管快速法
大肠菌群的测定
大肠菌群的测定
－－基本概念

大肠菌群指一群37℃、24h能发酵乳糖，产酸，产气，需氧和兼性厌氧的革兰 氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，以此作为粪便污染指标来评价 食品的卫生质量。 大肠菌群包括大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴 沟肠杆菌等。大肠菌群的来源分粪便来源和非粪便来源，在44.5℃仍能生长的 大肠菌群，称为粪大肠菌群，粪大肠菌群又叫耐热大肠菌群，在人和动物粪便 中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。因此，粪大肠菌群对粪便污染的 指示作用更为直接和贴切，主要就是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属，正是 由于包括了克雷伯氏菌属，使其与粪便污染的相关性受到了影响。 大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌这三个指标在实际工作中都在应用，但用途 有所不同，一般认为大肠菌群是水源的卫生指标和食品加工卫生状况的通用指 标，粪大肠菌群主要用于贝类和贝类养殖用水的卫生指标，大肠杆菌用于指示 食品受到近期粪便污染或不卫生加工。 大肠菌群表示方法：MPN（ most probable number） /100mL 。



大肠菌群的测定
－－乳糖发酵法（国标）




检验稀释 取样及稀释方法与菌落总数检验方法相同。 乳糖发酵试验 根据食品卫生要求或对检样污染程度的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳 糖胆盐发酵管。接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳 糖胆盐发酵管。置36±1℃温箱内,培养24±2小时,如所有发酵管都不产气,则可报告为大 肠菌群阴性,如有产气者,则与对照的混合菌种一起按下列程序进行。 分离培养 将产气的发酵管分别在伊红美兰琼脂（EMB琼脂）平板上划线分离。然后置 36±1℃温箱内，培养18～24小时后取出, 观察菌落形态,并作革兰氏染色和证实试验。 证实试验 在上述平板上,挑取可疑大肠菌落1～2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃ 温箱培养24±2小时,观察产气情况,凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可 报告为大肠菌群阳性. 报告 根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 结果


大肠菌群的测定


检测方法 结果记录
－－出口食品行业标准
大肠菌群的测定
－－注意事项




初发酵阳性管，只能经过平板分离和证实实验后，才有可能成为阳性。一般地说， 如果平板上有较多典型大肠菌群菌落，革兰氏染色为阳性杆菌，即可做出判定。如 果平板上有典型菌落甚少或不够典型，则应多挑菌落做证实试验，以免出现假阳性。 只做一步初发酵，就作判定，会有相当部分的合格产品被作为不合格样品处理。 在实际工作中，有时遇到初发酵时产酸，但导管内无气泡产生，复发酵却证实为大 肠菌群阳性。有时导管内无气体，但在液面及管壁却可看到小气泡。导管管口的完 整情况与导管外有无沉渣存在均可影响产气反应的观察，管口不完整性有利于气体 进入导管，管口周围有沉渣能阻碍或延缓气体进入。 大肠菌群菌落的色泽形状与检出率密切相关，伊红美蓝平板上大肠菌群菌落呈黑紫 色，有光泽或无光泽时，检出率最高。红色、粉红色菌落检出率较低。 MPN检索表第一栏阳性管数下面列出的毫升（克）系指原样品的毫升（克）数，并 非样品稀释后的毫升（克）数。在进行产品检测前，根据产品标准选择度，如大肠 菌群标准30个/100毫升（克）时，应选择稀释度为11.1毫升（克）。大肠菌群标准 3个/100毫升（克）时，稀释度则为1.11毫升（克）
粪大肠菌群的测定


检验稀释 44 ℃乳糖发酵试验
将接稀释液的乳糖胆盐发酵管，置于（44±0.5）℃水浴中，经 （24 ±2）h培养。 证实试验：将所有产气发酵管，分别转种在伊红美蓝琼脂平板 上，置（36±1）℃培养18～24h，并同时接种蛋白胨水，置 （44±0.5）℃培养24h。在平板上观察典型菌落，并做镜检。 在蛋白胨水内加入靛基质试剂约0.5mL，观察靛基质反应。 结果靛基质阳性，平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌