实验记录及数据处理 测定未知浓度RNA溶液的浓度

紫外分光光度计使用方法
认识 紫外分光光度计
认识 紫外分光光度计
认识 紫外分光光度计
紫外分光光度计使用方法

开机自检，预热
紫外分光光度计使用方法

将对照及样品依次放入比色池中 选择“光度测量”模式
紫外分光光度计使用方法

输入测量所需的波长


3、仪器与试剂 紫外可见光分光光计。 未知蛋白质标准溶液，可用结晶牛血清蛋 白或酪蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定 蛋白质含量，根据其纯度配制成 1~2.5mg/mL 的溶液。 0.9%NaCl溶液。



4、实验步骤 在紫外分光光度计上，将未知的蛋白质溶 液小心盛于石英比色皿中，以生理盐水为 对照，测得280nm和260nm两种波长的吸 光度（A280和A260）。将A280及A260波长处 测得的吸光度按下列公式计算蛋白质弄高 度 C=1.45A280-0.74A260 式中，C为蛋白质质量浓度（mg/ml）； 本法对微量蛋白质的测定既快又方便， 它还适用于硫酸铵或其他盐类混杂的情况 ，这时用其他方法测定往往较困难。

5、实验记录及数据处理 测定未知浓皿比较贵重，且易碎，使用 时要小心。 （2）测量吸光度时，比色皿要保持洁净， 切勿用手玷污其光面。
紫外分光光度计测定核酸含量

目的和要求 1、学习紫外吸收法测定核酸含量的原理。 2、掌握利用紫外分光光度计测定核酸含量 的方法
紫外分光光度计使用方法

比色池推到对照组对准光源， 调100%透过 率
紫外分光光度计使用方法

比色池拉到样品组对准光源， 测试。测量 结果依次显示在屏幕上。记录数据。
紫外分光光度计使用方法

切换波长，同样程序再测量其他波长处样 品的光吸收值。。
实验器材 紫外分光光度计 实验材料及试剂 RNA或DNA样品

实验步骤 将样品配置成每毫升含5~50μ g的核酸溶液， 于紫外分光光度计上测定260nm处的吸光 度，按下式计算核酸浓度和两者的吸收比 值： DNA浓度（ug/ml)=A 260/0.02 RNA浓度（ug/ml)=A 260/0.024

实验原理 DNA和RNA都有吸收紫外线的性质，最大 吸收峰在260nm波长处。紫外吸收是嘌呤环 和嘧啶环的共轭双键系统所具有的性质， 所有嘌呤和嘧啶的物质，都具有吸收紫外 线的性质。 用1cm光径的比色杯测定核酸的A260nm时， 1ug/ml的DNA溶液吸光度为0.020，同样 浓度的RNA吸光度为0.024.因此，可以用 下列公式计算样品的核酸含量 DNA浓度（ug/ml)=A 260/0.02 RNA浓度（ug/ml)=A 260/0.024

2、实验原理 蛋白质组成中常含有酪氨酸和色氨酸等芳香 族氨基酸，在紫外光280nm波长处有最大吸收 峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度呈正比，故 可用紫外分光光度计通过比色来测定蛋白质的含 量。由于核酸在280nm波长也有光吸收，对蛋 白质测量有一定的干扰作用，但核酸的最大吸收 峰在260nm。如同时测定260nm的光吸收，通 过计算可以消除其对蛋白质测定的影响。因此如 溶液中存在核酸时必须同时测定280nm及 260nm的吸光度，才能通过计算测定溶液中的 蛋白质浓度。