凝胶成像系统检定规程
一、引言
凝胶成像系统是一种常用的实验室设备,用于检测和分析凝胶电泳结果。
为了保证准确性和可靠性,需要对凝胶成像系统进行定期的检定。
本文将详细介绍凝胶成像系统的检定规程。
二、设备准备
1. 确保凝胶成像系统处于正常工作状态,并且已连接至电源和计算机。
2. 准备标准DNA样品和凝胶电泳胶。
三、检定流程
1. 调整曝光时间:在凝胶成像系统软件中选择适当的曝光时间。
首先,选择一个较短的曝光时间(如1秒),拍摄一张凝胶图像。
然后,逐渐增加曝光时间,直到凝胶图像的信号饱和为止。
2. 校准灰度值:选择一个合适的灰度标准,例如10个不同浓度的DNA样品。
使用凝胶成像系统软件测量每个样品的灰度值,并绘制出灰度与浓度的曲线。
根据曲线,确定不同灰度值对应的DNA浓度范围。
3. 检测分辨率:使用一组标准凝胶图像,其中包含一系列已知大小的DNA片段。
测量每个DNA片段的迁移距离并计算其分子质量。
将测得的分子质量与已知的分子质量进行比较,以验证凝胶成像系
统的分辨率。
4. 检测线性范围:使用一组标准DNA样品,其浓度从低到高依次增加。
测量每个样品的灰度值,并绘制出灰度与浓度的曲线。
根据曲线,确定凝胶成像系统的线性范围,即在该范围内,灰度值与DNA浓度呈线性关系。
5. 检测灵敏度:使用一组已知浓度的DNA样品,测量其灰度值。
根据灰度值与浓度的关系,确定凝胶成像系统的灵敏度,即系统能够检测到的最低浓度。
6. 检测背景噪音:拍摄一张未加样品的凝胶图像,并测量其灰度值。
将该灰度值作为背景噪音水平。
再测量几张已加样品的凝胶图像,并计算其背景噪音水平。
确保样品信号明显高于背景噪音。
7. 检测均匀性:拍摄一张均匀的凝胶图像,并测量其不同区域的灰度值。
确保灰度值在整个图像范围内变化不大,以保证成像系统的均匀性。
四、检定结果记录
对每个检定项目的结果进行记录,包括曝光时间、灰度标准曲线、分辨率、线性范围、灵敏度、背景噪音水平和均匀性。
记录中应包括检定日期、操作人员和设备型号等信息。
五、定期检定
凝胶成像系统应定期进行检定,以确保其性能稳定和准确性。
建议每个月进行一次完整的检定,并在每次使用前进行简单的功能检查。
六、结论
凝胶成像系统检定是保证实验结果准确性的重要环节。
通过校准曝光时间、灰度值、分辨率、线性范围、灵敏度、背景噪音和均匀性等参数,可以保证凝胶成像系统的准确性和可靠性。
定期检定是确保凝胶成像系统性能稳定的必要措施。