料和农药施用量，降低生产成本，保护了环境
一、植物脱病毒的机理
病毒在植物体内的分布是不均匀的，在茎尖中呈梯度 分布。 在受侵染的植株中，顶端分生组织无毒和含毒量极低。 较老组织的 含毒量随着与茎尖距离的加大而增加。
分生组织含毒量低的原因可能是： 1）植物病毒自身不具有主动转移的能力，无论在病田植株间 还是在病组织内，病毒的移动都是被动的。在植物体内， 病毒可通过维管束组织系统长距离转移，转移速度较快， 而分生组织中不存在维管束。病毒也可通过胞间连丝在细 胞间移动，但速度很慢，难以追赶上活跃生长的茎尖。 2）在旺盛分裂的细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复 制。 3）在植物体内可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比 其他任何区域具有更高的活性。 4）在茎尖中存在高水平内源生长素，可抑制病毒的增殖。
（二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠心胚， 种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带病毒。 （三）微尖嫁接脱毒 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖 （0.14-1.0mm,带3-4个叶原基），以培养脱毒苗的技术。 脱毒程序：无菌砧木培养——茎尖准备——嫁接——嫁接苗 培养——移植。
苹果茎沟病毒
苹果花叶病毒 苹果锈果类病毒 葡萄扇叶病毒 葡萄茎痘病毒
弗吉尼亚小苹果
兰蓬王、红玉和 金冠 国光 沙地葡萄圣乔治
葡萄卷叶病毒
欧亚种葡萄
叶片下卷、叶脉间变红
葡萄茎沟病毒
葡萄栓皮病毒 葡萄金黄病毒 葡萄脉坏死病 葡萄脉斑驳病
Kober 5BB
LN33 Baco 22A 110R 河岸葡萄
仅在Kober5BB上会产生茎沟
铃薯Y病毒
马铃薯 马铃薯X病毒 马铃薯G病毒 马铃薯S病毒 斑纹花叶病毒 甘薯 缩叶花叶病毒 羽毛状花叶病毒
1.0～3.0
0.2～0.5 0.2～0.3 0.2以下 1.0～2.0 1.0～2.0 0.3～1.0
鸢尾
菊花
花叶病
各种病毒
0.2～0.5
0.2～1.0 0.2～0.8 0.6 0.3～1.0 0.7～3.0 0.2～1.0
康乃馨 各种病毒 大丽花 大蒜 甘蔗 草莓 花叶病 花叶病毒 花叶病 各种病毒
二、热处理脱毒
脱毒原理 即热处理脱毒，一些病毒对热不稳定，在高于常温 的温度下（35-40度）即钝化失活。 1、温汤浸渍处理脱毒法 材料置于50℃左右热水中浸 渍几十分钟到数小时。 特点：简单易行，成本低，但易使材料受伤。适用： 甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。 2、热空气处理脱毒法 将植物用35～40℃的热空 气处理2～4周或更长时间。 特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间 适用：多数植物
三、抗血清鉴定法 •
（二）方法 1、叶绿体凝集法 2、块茎沉淀法 3、环形接口法 4、酶联免疫法：用梅标记抗原或抗体的微量测 定法。现在灵敏度较高和常使用的方法。
四、分子生物学鉴定
1、双链RNA法 通过提取纯纯化待测植物RNA，并对其进行电 泳分析，可确定dsRNA存在，从而判断待检植物是否 带病毒。 2、互补DNA（c DNA）检测法
可能很快又被重新感染。所以一旦培育得到无病
毒苗，就应很好保存，这些原原种或原种材料保
管得好可以保存利用5～10年。
一、无病毒苗的保存
（一）隔离保存 通常无病毒苗应种植在隔虫网内，使用300目，即网 眼为0.4～0.5mm大小的网纱，也可用盆栽钵。栽培用的 土壤也应进行消毒，周围环境也要整洁，并及时喷施农 药防治虫害，以保证植物材料在与病毒严密隔离的条件 下栽培。• 一种更便宜的方法，是把由茎尖得到的并已 另 经过脱毒检验的植物通过离体培养进行繁殖和保存。
第二节 脱毒苗鉴定 一、直接检查法 直接观察待侧植株生长状态是否异常，茎叶上有无 特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否存在。 二、指示植物法 将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作 为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。 即指示植物法。 特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只能 测出病毒的相对感染力。
节间肿大，部分叶片背面出现栓皮 植株矮化，叶片下卷、黄化
叶片背面沿叶脉出现坏死斑，卷须 和嫩梢坏死
褪绿斑，沿脉斑驳，叶片畸形 新叶上出现叶片扭曲，叶缘残缺呈 破碎状
柑橘碎叶病
腊斯克枳橙、特洛 亚枳橙、卡里佐枳 橙和厚皮来檬
三、抗血清鉴定法
特 • 异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟就可以完 成。植物病毒鉴定中最有用方法之一。 （一）原理 刺激抗体产生蛋白质抗原。抗原与抗体间能发 生高度专一性的血清学反应（免疫反应）

1971年日本人Mori获得了首例大蒜茎尖培养脱毒苗。 法国率先将脱毒蒜种应用与生产，并出口到澳大利亚等国。 我国于80年代初获得脱毒苗。1988年以来，山东省农业科 学院蔬菜研究所探明了侵染我国大蒜的主要病毒种类，提 出了一套脱毒蒜快繁技术，提高繁殖系数7-10倍，提出了 良繁体系，缩短了繁种周期，降低了生产成本，现在脱毒 蒜种已在我国大面积应用于生产。
也叫DNA分子杂交法
五、电镜检测法
运用电子显微镜可直接检测待检植物体内有 无病毒粒体存在，并根据所观察病毒的形态等对 病毒种类进行鉴定。是较为先进的方法，但需一 定的设备和技术。
第三节
无病毒苗的保存和繁殖
通过不同脱毒方法所获得的脱毒植株，经鉴 定确系无特顶病毒者，既是无病毒原种。 无病毒植株并不是有额外的抗病性，它们有
部分病毒的木本指示植物及相应症状
病毒种类 木本指示植物 苏俄苹果 司派227或光辉 表现症状
苹果褪绿叶斑病 毒
苹果茎痘病毒
叶片出现褪绿斑点，叶小，植株矮 化，长势弱
叶片反卷，植株矮化，皮层坏死 植株矮小，接合部内有深褐色坏死 环纹，木质部产生深褐色纵向条沟 叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑 叶和茎干锈斑、坏死斑 叶片出现褪绿斑点、线纹斑及环斑、 局部坏死、畸形；叶脉间出现星状 透明斑
（二）茎尖脱毒方法
1、取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶 芽与侧芽消毒接种 。
消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶
片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右， 用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最
后用无菌水冲洗材料4-5次。
酒精擦拭手
第一节 植物脱毒方法
一、茎尖培养脱毒
（一）通过茎尖培养脱毒的原理 1、病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎 尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。 2、茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分 生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基能 提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎 尖越大，脱毒效果差。
3、热处理结合茎尖培养脱毒 目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合起来的方 法脱毒。 特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率，又可剥离 较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱毒率。
适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去除的纺锤块
茎类病毒
三、其他组织培养脱毒方法
（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再 诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植株的方 法，即愈伤组织培养脱毒法。 部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面 的原因： 一是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度 较慢，赶不上细胞的繁殖； 二是愈伤组织发生了抗病毒突变。
第十章 无病毒苗木培育
目的与要求
了解脱毒意义，学习植物茎尖脱毒原理及其 操作程序，了解其他组织脱毒方法及应用，掌 握植物理化脱毒方法。学习植物脱毒苗的鉴定 方法，掌握各方法的鉴定原理，了解植物脱毒 苗的保存和繁殖方法。 具备植物茎尖脱毒技术基础，具有指示植物 鉴定脱毒苗的基本能力，有脱毒苗保存的认知。
徒长 水稻恶苗病
疮痂
卷叶 马铃薯卷叶病
指示植物法
几种马铃薯病毒的指示植物及表现症状
病毒种类 指示植物 表现症状 马铃薯X病毒 千红日、曼陀罗、辣椒、 脉间花叶 （PVX） 心叶烟 马铃薯S病毒 苋色藜、千日红、曼陀 叶脉深陷，粗缩 （PVS） 罗、昆诺阿藜 随品种而异，有些轻微花 马铃薯Y病毒 野生马铃薯、洋酸菜、 叶或粗缩，敏感品种反应 （PVY） 曼陀罗 为坏死 马铃薯卷叶 叶尖呈浅黄色，有些品种 洋酸菜 病毒（PLRV） 呈紫色或红色


1952年Morel等培养大丽花茎尖获得第一株植物脱毒苗， 1955年又获得了马铃薯脱毒苗。20世纪70年代，几乎所有生 产马铃薯的国家都在生产中使用这一技术，到1975年，用该 技术生产脱毒种薯的马铃薯品种已达150个左右。 1974年中国科学院植物研究所等开展马铃薯茎尖培养脱 毒技术的研究及应用推广工作，80年代中期脱毒马铃薯进入 生产阶段，90年代中期脱毒马铃薯已经覆盖了我国的大部分 马铃薯产区，创造了可观的经济效益。
所谓脱毒就是采用一定的方法除去植物体内病毒的技 术。
无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检
测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反应的苗木。
应用植物脱毒技术意义 植物脱毒技术可使植物恢复原来优良特性，生长势增强，
明显提高产量、改善品质，产量的提高幅度最高可达300%。
植物脱毒技术不仅脱除了病毒，还可以去除多种真菌、 细菌及线虫病害，使种性得以恢复，植株生长健壮，减少肥
1988年，山东省农业科学院植物研究所进行甘薯病毒 病调查毒源鉴定工作，明确了侵染甘薯的病毒种类，传毒 介体的传播途径，形成了茎尖培养、病毒检测、脱毒种薯 的快繁和推广应用的配套技术。 此外，芋头、大姜脱毒种在我国、日本、泰国等地已 投放市场。 多种蔬菜、果树、林木、药用植物的脱毒快繁技术研 究和应用也发展迅猛，有些已形成具一定规模的工厂化产 业
（三）培养基与培养方式 1、培养基：MS， White , Morel等
2、培养方式：一般采用半固体培养基。