37℃培养24h后，所生长细菌菌落的总数。
◈生活饮用水的细菌总数lmL不得超过100个
一、细菌总数测定的意义
◈可以反映水体有机污染的程度
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Ⅰ 细菌总数的测定
二、培养基的制作 三、测定方法及步骤
1.稀释水样 2.接种水样 3.培养：37℃下倒置培养24h
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（四）实验方法
培养基的制备过程 称量---溶解----调节pH值----过滤---分装及包扎----灭菌----灭菌后试管 摆放斜面
1.称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。 配方：牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂 20.0g,蒸馏水1000ml,pH7.0。
适用于无菌室，接种箱，手术室内的空 气及物体表面的灭菌。
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2、步骤 1）单用紫外灯 在无菌室内或在接种箱内打开紫外线
灯开关，照射30min，将开关关闭。 2）化学消毒剂与紫外线照射结合使用 在无菌室内，先喷洒化学消毒剂溶液，
再用紫外线灯照射15imn
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水中细菌总数测定
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（二）实验原理
培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物 所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一 种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、 无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞 组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、 培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配 制合适的培养基.
不同层次的搅扰；同一采样点与理化监测项目同时采样时，应 先采集细菌学检验样品
（6）采样完毕，做好记录
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二、样品保存
采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学 检验。一般从取样到检验不宜超过2h，否则应 使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超 过6h
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Ⅰ 细菌总数的测定
细菌总数：指lmL水样在营养琼脂培养基中，于
用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌 2、湿热灭菌
⑴高压蒸汽灭菌法 ⑵间歇灭菌法 ⑶煮沸消毒法
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（三）实验器材
1.药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10％ NaOH溶液、10％盐酸溶液。
2.器材：天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、 PH试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、 棉花、线绳、干燥箱、高压锅。
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一、水样的采集
1. 采水容器
① 采样瓶：具磨口玻塞的500mL广口瓶 ② 采样瓶的洗涤
③ 采样瓶的灭菌: 160～170℃干热灭菌2h，或用高压蒸 汽灭菌器，121℃灭菌15min
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一、水样的采集
2. 采样步骤及注意事项
(1)去氯和高浓度重金属：灭菌前按500mL采样瓶加入 0.3mL10%Na2S2O3溶液
(2) 采集江、河、湖、库等地表水样时，可握住瓶子下部直 接将已灭菌的带塞采样瓶插入水中，约距水面10～15cm处采 （集3）采集一定深度的水样时，可使用单层采水器或深层采水器
（4）从自来水龙头采集样品时，采水前可先将水龙头打开至最 大，放水3～5min，用酒精灯火焰灼烧约3min灭菌
（5）在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免
培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物 理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、 半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液 体培养基。
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灭菌是指应用物理或化学的方法，杀 灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢 和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、 照射和化学药品法等。
常用加热灭菌法： 1、干热灭菌：
5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞 而引起污染。
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（五）实验作业
为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？
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消毒与灭菌
1．干热灭菌法 2．高压蒸汽灭菌 3．紫外线灭菌法
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（二）高压蒸汽灭菌
1、原理
利用加热一个密闭的加压灭菌锅，使灭 菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。由于蒸气不 能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸 点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。
一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～ 30min
加2水、步骤装待灭
菌物品
加盖
加热
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灭菌时间到后 断电源
压力降为零 开箱取物
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（三）紫外线灭菌法 1、原理
紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸 腺嘧啶二聚体的形成和DNA 链的交联，从而 抑制了DNA 的复制。另一方面，由于辐射能 使空气中的氧电离成[O]，再使O2 氧化生成 臭氧或使水氧化生成H2O2。O3 和H2O2 均有 杀菌作用。
2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；
2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好 的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免 琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；
4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高 的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，三角瓶的装量不超过瓶 体的1/2 ；
水中的细菌总数测定
1. 培养基的配制 2. 消毒与灭菌 3. 水中细菌总数的测定 4. 菌落计数法
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培养基的制备与灭 菌
（一）实验目的
（二）实验原理
（三）实验器材
（四）实验方法 （五）实验作业
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（一）实验目的
1、明确培养基的配制原则； 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤； 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围； 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌 方法。
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2.溶解
向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌，加热使 其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过 程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢 出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。
3.调节pH值
用玻璃棒沾少许液体，测量PH值。用氢氧化钠和 盐酸调节PH。
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4.过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省 去。
5.分装及包扎
根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试 管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口 塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。
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6.灭菌：高压蒸汽灭菌，1210C灭菌20分钟。
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7. 灭菌后试管摆放斜面
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பைடு நூலகம்
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注意事项
1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；