培养基
MTT assay
1、细胞的存活率存在浓度依赖性，随浓度升高降低 2、IC50显示出BF211比BF表现出对细胞更强的抑制增殖作用。
IC50 （nM） BF BF211 24h 22.00 ± 3.53 6.76 ± 0.41 48h 10.20 ± 1.01 4.01 ± 2.68
流式细胞图
BF211和BF的影响是相似的。 然而，BF211的影响可能略低 于BF在某些浓度，如0.1μM
BF和BF211对A549内游离Ca2 +水平随时间变化的 影响
荧光材料：Fluo-3 AM (S1056, Beyotime Biotechnology, Shanghai, China)
BF和BF211表现出抑制A549细胞的 Na + / K + ATPase在动力学的差异。
加药 生理盐水
阳性对照
Rapamycin
实验一
实验二
BF211
实验三
剂量mg/kg
注射部位 频率 i.p. q.d
10
i.v. weekly
2
i.p. q.d
4
i.p. q.d
6
i.p. q.d
低浓度BF与BF211都对肿瘤有微弱 的抑制作用，但BF211效果略高于 BF。
BF211在2、4、6毫克/公斤呈浓度依赖 性抑制对移植瘤生长的影响。BF211浓 度6毫克/公斤几乎完全抑制了肿瘤的生 长
A549 Na+ / K+ -ATP酶α 亚基的mRNA水平的RTPCR分析
PCR扩增ATP1A1（编码α1亚单位）ATP1A2（编码α2亚基）ATP1A3（编码α3亚基）
注：α1的表达较为广泛，而α2 亚基是目前主要表达在肌肉、 心脏、大脑等。α3的几乎完全 是在神经元和卵巢中发现的， 但它也发生在白细胞和一些物 种的心肌细胞。α4只表达于精 原细胞合成精子阶段
化学结构
BF、BF211 化学物质
A549, NCI-H460, NCI-H522 and NCI-H1299 细胞系 RPMI 1640 、10% FBS,、100 units/mL Penicillin、 100 μg/mL Streptomycin、 37°C 、5% CO2
BF211比BF诱导细胞凋亡的能力强，且BF和BF211之间差异显 著 在浓度为25和50纳摩尔。
动物毒理实验（腹腔注射）
BF211 LD50 测定（14组140只）
M（mg/kg） F（mg/kg） 9.4 9.8 11.1 11.5 13.1 13.6 15.4 16 18.1 18.8 21.3 22.1 25 26
A549细胞的Src活化与BF、BF211的时间依赖性 影响
治疗后BF迅速诱导Src使其 P-src显著增加，1 h后，水 平下降。BF211诱导在1 h 和3 h后P-Src水平显著增加。 反而BF211对于src活性的 抑制作用比BF差，故猜想 与其他信号通路有关。
Caspase-3活性测定
鼠种：Balb/c-nu-nu 6-7周 种植位置：右侧腋腹壁
比较在相同浓度的BF和BF211抗癌作用（接种后D）
实验二 BF211 0.4(7d) 1.6(9d) i.p. q.d 0.8 i.p. q.d 0.4(7d) 1.6(9d) i.p. q.d
高浓度测定抗癌效应（接种后15D）
空白对照
α2亚基的表达很低，而在α1亚基表达的A549细胞中是相当高的 表达强度α1>α3>α2
SPR生物传感器分析
仪器：Biacore 3000（Biacore AB, Rapsgatan 7, S-754 50 Uppsala, Sweden） 芯片：CM5(羧甲基化葡聚糖)传感器芯片 方法：α1（11403.2 RU）,α2（12038.9 RU） ,α3（11773.4 RU） 固定在CM5与EDC和 NHS标准伯胺偶联方法(共价偶联法） 步骤：
α1蛋白，BF211与BF的K D值是相似的，结合力相近。 α2蛋白，BF211的K D值比BF较高，这表明BF211与α2蛋白的结合亲和 力比BF低。 α3蛋白，BF211的K D值比BF低，表明BF211与α3蛋白的结合亲和力明 显高于BF。 但是BF211能更快的与α1蛋白结合和解离。
猪皮质钠钾泵活性实验
BF急性毒性研究 （4组40只）
M/F 2.8 mg/kg 3.5 mg/kg 给药频率 1次/24H
结果：
注：文献中BF (i.p.) LD50 为2.2 mg/kg， BF急性毒性研究证实了这一浓度准确性
这些结果表明，与BF相比，BF211对于小鼠的毒性要低得多。
A549肿瘤异种移植实验
空白对照 加药 剂量mg/kg 注射部位 频率 i.p. q.d 生理盐水 阳性对照 Rapamycin 10 i.v. weekly 0.8 i.p. q.d 实验一 BF
1、BF和BF211能诱导Caspase-3的活化和PARP的 切割。 2、BF211对细胞凋亡相关信号级联的诱导作用， 高浓度均高于的BF更强。 3、BF和BF211可诱导以浓度依赖性方式Caspase3的活性的增加，而BF211的作用显着比的BF显 著更强。
BF211的优势
• 低毒 • 高效