实验三过氧化氢酶活性得测定
一、实验目得:
了解过氧化氢酶得作用,掌握碘量法测定过氧化氢酶活性得原理与方法;
二、实验原理:
过氧化氢酶就是一类色素蛋白,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水与分子氧,在此过程中起传递电子得作用,过氧化氢既就是氧化剂又就是还原剂。
R(Fe＋2)2＋H2O2---R(Fe+3OH)2
R(Fe+3OH)2+ H2O2 ----R(Fe＋2)2+2H2O+O2
并合上式:H2O2 ----2H2O+O2
据此,可根据消耗H2O2得消耗量或O2得生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量得过氧化氢溶液,经酶促反应后,加入过量得KI溶液生成得I2用标准得Na2S2O3滴定,根据N a2SO3消耗得体积计算H2O2得消耗量。
三、实验材料、仪器与试剂:
1、实验材料:小白菜
2、仪器:恒温水浴锅、研钵、容量瓶、刻度吸管、100mL三角瓶
3、试剂:
(1)0、05mol/L H2O2 (2)2mol/LH2SO4
(3)0、1mol/L Na2S2O3
(4)1%淀粉溶液(5)10%(NH4)6Mo7O24
(6)pH7、8得磷酸缓冲液(7)20% KI
(8)CaCO3
四、实验步骤:
(1)酶液提取:
称取2.5g白菜叶,加少量CaCO3,2mLpH7、8得缓冲液少量,研成匀浆,移入100ml 容量瓶,用上述缓冲液冲洗研钵数次转入容量瓶中定容,静置10分钟,过滤。
取滤液10mL于另一100mL得容量瓶中稀释定容待测(根据酶活高低而定)。
(2)酶促反应:
取锥形瓶4个,编好号各加入10ml酶液之后,立即向两个瓶中加入2mol/L H2SO45mL,终止酶活性,作空白对照。
向另外两瓶各加H2O25mL,摇匀,在加入H2O2得那一刻起,记录时间,5分钟后迅速向实验瓶中加入2mol/LH2SO45mL,终止酶活性。
向三角瓶中加1mL 20% KI与3滴(NH4)6Mo7O24,摇匀后迅速用标准Na2S2O3溶液进行滴定至淡黄色,加入1mL1%淀粉指试剂,蓝色恰好消失,记录消耗得Na2S2O3得体积V0,V;
五、结果记录与数据处理:
被分解得H2O2量(mg)=(空白滴定值-样品滴定值)×Na2S2O3摩尔浓度×17
过氧化氢酶活性(mg、g-1、min-1)=
六、结果分析与问题讨论:
实验十还原型V C含量测定
一、实验目得
学会从生物样品中提取维生素C方法,了解蔬菜中维生素C得含量。
学会测定维生素C含量得原理与方法,进一步掌握滴定法得基本操作技术、二、实验原理
Vc由于其结构中具有烯二醇得结构,所以它就是一种强还原剂,易被弱氧化剂氧化脱氢而成氧化型抗坏血酸。
Vc在酸性溶液中比中性溶液及碱性溶液中稳定,但易被热、光及某些金属离子破坏。
本实验就是用碘液作氧化剂,淀粉为指示剂,当Vc全部被氧化后,过量一滴碘液与淀粉指示剂反应生成淡兰色络合物,即为终点。
三、实验材料、试剂及仪器
材料:西红柿。
试剂:
2％草酸溶液:称取20g草酸溶于蒸馏水中,溶解后稀释到1000mL,混匀;
1％可溶性淀粉溶液:称取1g可溶性淀粉用少量蒸馏水调成匀浆,倾入80 mL得沸水中继续煮沸至透明,冷却后稀释至100 mL;
0.1mol/L碘液(随用随配):称取6.5克碘与20克碘化钾于研钵中,加少量得蒸馏水研磨至完全溶解后稀释至500毫升混匀。
贮存于棕色试剂瓶中;
1％草酸溶液:称取10g草酸溶于蒸馏水中,溶解后稀释到1000mL,混匀;
0、1mg/mLVc标准溶液:准确称取抗坏血酸10mg,溶于1％草酸溶液中稀释至100mL 贮存于棕色试剂瓶中冷藏(现用现配)。
仪器:万分之一电子天平;棕色酸式滴定管;三角瓶等。
四、实验操作步骤:
1、碘液得标定:吸取0、1mg/mLVc标准溶液10mL于100mL得锥形瓶中,加5滴可溶性淀粉,摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色,且30秒内不退色,即为终点。
滴二个平
行样。
2、样品得提取:准确称取10g左右得样品1份,
用少许2%草酸溶液研磨成匀浆,转入100mL容量瓶中,用2%得草酸溶液洗研钵3-4次,一并转入容量瓶中,最后用2%草酸溶液定容至100mL摇匀,放置10分钟后过滤,滤液备用。
3、滴定:
空白滴定: 准确吸取10mL2%草酸溶液于100mL得锥形瓶中,加5滴1%淀粉指示剂,摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色,且30秒内不退色,即为终点,滴二个平行样。
样品滴定: 准确吸取10mL样品于100mL得锥形瓶中,加5滴1%淀粉指示剂,
摇匀后用稀碘液滴定至浅蓝色,且30秒内不退色,即为终点,滴二个平行样。
六、数据记录及计算
1、样品得重量(g):样品1:W
1
=
样品2:W
2
=
2、碘液得标定(mL): V
1 = V
2
=
=
3、样品得滴定(mL):
4、空白得滴定(mL):
5、计算:
每毫升碘液相当于Vc得毫克数K(mgVc/mLI
2
)= Vc得含量(mg/100g 样品)=
六、结果分析与讨论。