精浆中性α-葡萄糖苷酶定量检测试剂盒
简介：
精浆中含有源于附睾的中性α-葡萄糖苷酶同工酶和前列腺分泌的酸性同工酶，后者能够被选择性抑制，因此测定中性α-葡萄糖苷酶可反映附睾的功能。
Leagene 精浆柠檬酸定量检测试剂盒测定原理是硝基苯酚吡喃葡萄糖苷(PNPG)在α-葡萄糖苷酶的作用下分解成p-硝基苯酚(PNP)，p-硝基苯酚通过96孔板测定仪或分光光度计测定吸光值，同时做PNP 标准曲线，通过标准曲线来计算精液中PNP 的具体含量，经过换算获得中性α-葡萄糖苷酶的活性。
Leagene 精浆柠檬酸定量检测试剂盒是根据Cooper 法改良而来，在合适浓度范围内有较好的线性关系。
用分光光度计测定吸光值，若采用比色杯时，应按照比例调节精液和试剂的量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 1.5ml 离心管
2、 正向置换型加样器
3、 水浴锅或恒温箱
4、 96孔板
5、 酶标仪或分光光度计
操作步骤(仅供参考)：
1、 制备标准曲线：用PNP Developer 稀释PNP 标准(5mM)。
取离心管加入PNP 标准
(5mM)和PNP Developer 混合，即获得浓度为200μM 的PNP 标准；取离心管，分
编号 名称
TC0104 50T Storage
试剂(A): PNP Developer 100ml 4℃ 试剂(B): α-Gul Inhibitor 1ml -20℃ 试剂(C): PNPG powder 5支 4℃ 避光 试剂(D): PNPG buffer
50ml RT 试剂(E): PNPG Stopping buffer 50ml RT 试剂(F): PNP 标准(5mM) 2×1ml
-20℃ 避光
使用说明书
1份
别加入480μl、360μl、240μl 、120μl 的PNP标准(200μM)并依次加入120μl、240μl、360μl 、480μlPNP Developer并混匀，即获得浓度为160μM、120μM、80μM、40μM的PNP标准。
2、制备样本：离心精液样本，取上层精浆置于新的离心管，储存于待检。
3、样本预处理：解冻去除精子的精浆，在混旋器上充分混匀。
取若干新的离心管，用正向
置换型加样器加入混匀好的精浆，每个精浆样本应加入作为复测。
同时取离心管，加入作为空白对照。
可选步骤：取离心管加入含有中和低活性葡萄糖苷酶的内质量控制的混合和4份含有高活性葡萄糖苷酶的内质量控制的混合精液。
4、样本检测：
①精液空白：向含高活性质控的混合精液中加入α-Gul Inhibitor，产生精液空白值。
②配制PNPG孵育液：取PNPG powder加入PNPG buffer，恒温振荡器上50℃振
荡10min，使其完全溶解。
③PNPG孵育：向每个离心管中加入PNPG孵育液，孵育，在孵育过程中要准确控制
温度和时间。
④终止反应：向每管样本中加入PNPG Stopping buffer，混匀，终止孵育。
⑤测OD值：将标本、标准品、空白对照、精液空白、ddH20小心移入96孔板中，
以ddH20作为空白管调节零点，用酶标仪或96孔读数板读下的结果。
计算结果：
①做PNP标准曲线，从标准曲线上读取产生的PNP浓度(μM)。
②乘以校正系数(0.6194)得到未稀释精浆中的α-葡萄糖苷酶的活性(U/L)。
注：1单位
(U)葡萄糖苷酶活性=37℃条件下每分钟产生1μmolPNP。
由于检测分析的结果是
在1.115ml总体积中含有15μl精液，孵育120min条件下获得的，因此，校正系数=1115/15/120=0.6194。
③从每个样本中减去加入α-Gul Inhibitor的精液空白值，得到校正的葡萄糖苷酶的活
性。
④乘以1次射精的精液体积，得到每次射出的精液中葡萄糖苷酶活性(mU)。
⑤参考值：一次射精柠檬酸浓度≥20mU。
注意事项：
1、建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。
2、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检
测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。
使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
3、所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样本后重新测定。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
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