mV 3216003
21
mV 32160
691215min 03691215min
A B
图1高效液相色谱图
A.血浆样品+内标；B.空白血浆；1.艾司唑仑；2.地西泮
Fig 1HPLC Chromatograms
A. plasma+internalstandard；B. blank plasma；1. estazolam；2. diazepam
按“2. 4”项下方法，分别配制含艾司唑仑0. 3968、0. 2480、
－1
0. 0992μg ·mL高、中、低3种浓度的样品各5份，按“2. 1”项色谱条件进样检测，以内标法计算回收率；同法制备含艾司唑仑高、中、低3种浓度样品各1份，分别在同日不同时间进样5次，以及在3d内进样5次，以样品及内标峰面积比值计算日内及日间精密度。精密度及回收率试验结果见表2。
－1
ODS 2C 18为色谱柱，甲醇-乙腈-水（28∶28∶54）为流动相，1. 0mL ·min为流速，35℃为柱温，230nm为检测波长，地西泮为内标，考察服用艾司唑仑片患者血浆、碱化血浆、血清浓度并对选定的标本及提取方法进行验证。结果：艾司唑仑血浆浓度明显高于碱化血浆及血清浓度，经成对双侧t检验，艾司唑仑血浆浓度与碱化血浆及血清浓度比较（P分别为0. 01130、0. 01817），有显著性差异。艾司唑仑血药浓度在0. 0494～1. 2896μg ·mL－1范围内线性关系良好（r＝0. 9918），定量下限为0. 0494μg ·mL－1；平均日内、日间RSD均＜10％，平均回收率为99. 95％～100. 79％。结论：采用患者血浆作为标本进行艾司唑仑血药浓度监测和药物中毒的定量分析可行，本方法简便、准确。关键词艾司唑仑；血浆；碱化血浆；血清；高效液相色谱法；血药浓度
－1
于10mL玻璃试管内，加入0. 02mg ·mL地西泮内标溶液25µL，加入0. 01mol ·L－1氢氧化钠0. 25mL碱化，涡旋混匀，加入乙酸乙酯5mL，涡旋震荡3min，3500r ·min－1离心10min，分离乙酸乙酯于10mL试管内，45℃下N 2气流吹干，甲醇100µL溶解，作为碱化血浆样品溶液。（3）精密取患者血清1mL，置于
Method Validation of Plasma Concentration Determination of Estazolam by HPLC HOU Da-ping，ZHANG Zhi-guo，GUO Yu-zhi，LEI Li-li，HUANG Zhan（The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154002，China）
－1
相：甲醇-乙腈-水（28∶28∶44）；流速：1. 0mL ·min；检测波长：230nm；柱温：35℃；进样量：20µL。2. 2标准溶液的制备
2. 2. 1艾司唑仑标准溶液：准确称取艾司唑仑标准品24. 80mg，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液5mL，置于50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得浓度为0. 0248mg ·mL－1的艾司唑仑标准溶液。2. 2. 2内标溶液：准确称取地西泮标准品5. 00mg，置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液[5]
－1
10mL玻璃试管内，加入0. 02mg ·mL地西泮内标溶液25µL，涡旋混匀，加入乙酸乙酯5mL，旋涡震荡3min，3500r ·min－1离心10min，分离乙酸乙酯于10mL试管内，45℃下N 2气流吹干，甲醇溶解100µL，作为血清样品溶液。2. 3. 3血样测定：分别取血浆样品、碱化血浆样品和血清样品，按“2. 1”项色谱条件进样检测，以内标法计算含量，结果如表1。
高瑞林，李华，杨辉，等.静脉注射a 12b干扰素治疗
婴幼儿病毒性肺炎疗效分析[J].中国综合临床，2001，17（7）：560.
＊主任药师。研究方向：临床药学。电话：0454-8623360
#通讯作者：主任药师。研究方向：药物分析与药动学。电话：China Pharmacy 2011V ol. 22No. 140454-8623372。E-mail：zzg-0000@ ·1280·
HPLC法测定艾司唑力力，黄展（佳木斯大学附属第一医院，佳木斯市154002）
中图分类号
R 969. 1；R 971+. 3
文献标识码
A
文章编号
1001-0408（2011）14-1280-03
摘要目的：建立测定艾司唑仑血药浓度的方法，以确定较好的检测条件。方法：采用高效液相色谱法，以依利特Hypersil
艾司唑仑含量/μg·mL -1
碱化血浆0. 079120. 054420. 083290. 028100. 055280. 070650. 062970. 056490. 046120. 171820. 07113
血清0. 081800. 053190. 080270. 029240. 058520. 075340. 063100. 055460. 047860. 169820. 07146
[1][2][3]
血浆、碱化血浆和血清作为标本检测，为确定一种较好的方法，本文对使用标本、提取方法进行了初选，结果使用血浆作为标本，艾司唑仑检出率较高。以此为基础，对HPLC法检测血浆艾司唑仑血浆药物浓度方法进行了验证，结果证明此法简便、准确。
艾司唑仑标准品（中国药品生物制品检定所，批号：
1219-0102）；内标：地西泮标准品（中国药品生物制品检定所，批号：171225-200302）；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2
2. 1
方法与结果
1
1. 1
材料
仪器
P 230Ⅱ高效液相色谱仪（大连伊利特分析仪器有限公司）；XW-80涡旋混合器（上海精科实业有限公司）；AUW 220D十万分之一分析天平（日本岛津公司）。1. 2试药
科杂志，1994，9（6）：343.
色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS 2C 18（250mm×4. 6mm，5µm）；流动
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for plasma concentration determination of estazolam，and to confirm optimal determination conditions. METHODS：HPLC method was adopted. The determination was performed on Elite Hypersil ODS 2C 18column with methanol-acetonitrile-water（28∶28∶54）as mobile phase at flow rate of 1. 0mL ·min－1. The column temperature was set at 35℃and detection wavelength was 230nm. Diazepam was used as the internal standard. The concentrations of estazolam in plasma，alkalinized plasma and serum in patients receiving estazolam were determined. Selected samples and extraction method were verified. RESULTS：Plasma concentration of estazolam was significantly higher than those in alkalinized plasma and serum. In bilateral paired t test，the concentration of estazolam in plasma was significantly different from that in alkalinized plasma and serum（P＝0. 01130and P＝0. 01817）. The linear range of estazolam was 0. 0494～1. 2896μg ·mL－1（r＝0. 9918）. The minimum quanti-tation limit was 0. 0494μg ·mL－1. The average recovery rate was 99. 95％～100. 79％. The RSD of intra-day and inter-day were less than 10％. CONCLUSION：It is feasible to collect plasma sample of patients for plasma concentration monitoring of estazolam and quantitation analysis of drug poisoning. The method is simple，accurate. KEY WORDS Estazolam；Plasma；Alkalinized plasma；Serum；HPLC；Plasma concentration艾司唑仑为临床常用的镇静催眠药，也可用于抗焦虑、抗癫痫治疗，大剂量可引起外周神经肌肉阻滞、兴奋不安等不良反应，严重的可导致死亡。鉴于其临床应用广泛，监测其血药浓度对临床治疗和中毒抢救均有重要意义。然而，在高效液相色谱（HPLC）法测定艾司唑仑血药浓度时，文献报道有使用
2. 5
标准曲线的制备
精密取健康人血浆1mL，置于10mL玻璃试管内，加入0. 02mg ·mL－1地西泮内标溶液25µL，加入0. 0248mg ·mL－1艾司唑仑标准液分别为2、6、10、14、18、22、26、52µL，涡旋混匀，加乙酸乙酯5mL，涡旋震荡3min，3500r ·min－1离心10min，分离乙酸乙酯于10mL试管内，45℃下N 2气流吹干，甲醇100µL溶解，按“2. 1”项色谱条件进样，记录色谱。将艾司唑仑的标准浓度（X）对其峰面积与内标峰面积比值（Y）进行线性回归，得艾司唑仑回归方程为Y＝1. 3183X +0. 0656（r＝0. 9918），结果表明，艾司唑仑血药浓度在0. 0494～1. 2896μg ·mL－1范围内线性关系良好，定量下限为0. 0494μg ·mL－1。2. 6加样回收率及精密度试验