液质联用仪操作规程CG-YF1358-2010 1操作前检查1.1 检查氮气和氩气的出口压力，压力分别为0.5~0.6MPa和0.1~0.2MPa1.2检查洗针溶液和流动相1.3 流动相须现配并超声，缓冲盐溶液过0.22μm微孔滤膜（或者使用色谱纯的盐溶液和酸溶液）1.4 如使用溶融石英进样管，操作前应检查石英管是否拉长，确保其未超出ESI探针尖端。
1.5 检查系统真空度，电离真空计读数（分析仪区域）应小于5×10-6 Torr。
1.6 检查废液液位，及时清空废液。
2操作步骤及注意事项2.1 开机2.1.1 打开UPS电源2.1.2 打开质谱电源，即打开质谱主电源开关（Main Power Switch）至On（/）位置；打开真空开关（Vacuum Switch）在Operational状态；用密封垫或者放电针堵上离子传输毛细管；真空开关开启约10小时后，打开电子开关Electronics Service Switch）在Operational状态；2.1.3 打开计算机（此时液相和质谱内置的CPU会通过网线与电脑主机建立通讯联系，这个时间大约要1～2分钟）2.2双击Quantum tune图标，进入质谱界面，点击Quantum Tune Master界面上图标，查看质谱状态，确认Fore Pump Pressure为1.0~1.5 mTorr，Ion Gauge Pressure小于6e-6 Torr。
2.3 打开自动进样管理器和液相泵的电源2.4 化合物ESI/MS/MS质谱条件优化建立2.4.1. 双击桌面图标，打开Quantum Tune Master 界面；2.4.2. 在Tune Master 中界面上，选择菜单Workspace，选择Compound OptimizationWorkspace 按钮，显示Compound Optimization 工作界面；2.4.3. 设置优化参数：A. 选择Optimization Modes (优化模式)：MS Only按钮；B. 在Optimization Mass 列表中，输入母离子质量数;C. 在优化参数列表中，选择() 优化的参数(Spray V oltage，Sheath gas pressure，Aux gaspressure，Tube lens offset，Skimmer offset)；D. 单击Start 按钮，开始优化；优化结束后, 选择Accept按钮；E. 选择Optimization Modes (优化模式):MS+MS/MS按钮；F. 在Optimization Mass 列表Num product 列中，输入子离子个数(1~8)；G. 在优化参数列表中, 选择() 优化的参数(Collision energy)；H. 单击Start 按钮，开始优化；优化结束后，选择Accept按钮；I. 参数优化完成，保存质谱方法：选择Save tune as 按钮，选择保存位置，输入文件名称，保存质谱方法(.TSQTune文件)；J. 单击定义扫描模式Define scan 快捷图标，在扫描模式区单击鼠标右键, 选择Copy scan event。
2.5 化合物LC/MS/MS方法建立2.5.1. 双击桌面上LC Quan快捷图标,点击Creat a New Workbook，输入相应Study Name（研究课题的名称等）及Workbook name（实验的名称和日期），继续点击next，选择同一文件夹里已存在的workbook，即导入该项目的方法（首次编辑方法时不选择该项）。
继续点击Next，进入LCquan主界面2.5.2. 在LCquan主页上，点击Instrument Setup按钮，建立LC/MS/MS方法；2.5.2.1. 设置液相色谱部分参数：A. Surveyor自动进样器参数设置：1) 点击Instrument Setup窗口中的Surveyor AS图标；2) 输入Wash Volume (如400 μl)，Flush Volume (如400 μl)；Injection Volume：进样量，若定量环为25ｕL，Partial Loop部分进样一般设置为10ｕL（即小于定量环体积的1/2），（建议使用Partial Loop部分进样）；若需Full Loop满环进样，则设置为25ｕLNeedle Height from bottom：2.0mmSyringe Speed（ｕL/s）：8.0Flush Volume：如400ｕLFlush/Wash Source：BottleWash Volume：如400ｕLTray Temperature：10℃左右（视样品性质而定）Column Oven Control：35℃左右（视样品性质而定）B. Surveyor 液相泵的参数设置：1) 点击Instrument Setup窗口中Surveyor pump图标；2) 输入A，B，C，D流动相名称，Column Description(色谱柱标注)；3) 设置流动相条件(流动相比例，流速等)；点击Pump General，输入A、B、C、D各相代表流动泵中的流动相溶液的名称，最大柱压设定为400.0Bar；点击Gradient Program，设定流动相梯度，可以使用等度洗脱或梯度洗脱。
2.5.2.2. 设置质谱部分(TSQ Quantum)参数:点击Instrument Setup窗口中的TSQ Quantum图标;1) 图中第一栏Run setting是设定样品的运行时间（MS Acquire Time）是否使用分段扫描（Segments）等MS Acquire Time：样品的运行时间Segments：若被测化合物较多时，可设置此项Scan Events：设定扫描事件Tune Method：即在Quantum Tune软件下优化的目标化合物的质谱条件Scan Events 1：对于定量分析来说我们经常使用的是SRM（选择反应监测），需要设定母离子和子离子，扫描时间和各子离子的碰撞能量。
2) Same value for all SRMsScan Witdth（m/z）：0.002~5Scan time：0.5左右（具体值是扫描点数而定）Peak Width Q1（FWHM）：0.4或0.7（一般设定为0.7）Polarity：正负电离模式Data type：Centroid或profile，样品分析时一般设置为CentroidSkimmer Offset：视化合物情况决定是否需要设定3) 这些设置的值在进行化合物的质谱条件优化时，可以拷贝到此界面下，即单击Paste scan event按钮.2.5.2.3点击质谱界面上的液相色谱控制按键AS/LC/GC Direct Control，进入液相控制界面，观察各管路中是否有气泡，若有气泡，打开purge阀，Accela Pump界面上的flow设定为1000ｕL/min，将需要排气泡的管路流动相比例设置为100%，点击Apply，完成后，关闭purge 阀，将与purge阀连接的注射器中的液体排出。
2.5.2.4 观察自动进样管理器挂壁上的注射器内是否有气泡，若有气泡，则点击下拉菜单中的flush syringe，设定flush 的体积为合适的值，如6000ul，流速为100ｕL/min，点击Apply，完成后，若还有气泡则重复一次，直到没有气泡为止。
2.5.2.5 设定进样方法所用流动相的起始比例及对应流速，平衡色谱柱至泵压稳定。
2.6 样品序列建立及样品分析2.6.1点击菜单栏Acquisition中的Set upA. 选择样品类型Sample Type: Unknown, QC, Blank,B. 输入文件名称File Name：可以手动输入，也可点击鼠标右键浏览，选择已经存在的文件的文件名;C. Sample Name：样品名称，一般设定为样品编号D. Level：用于定量计算时设置的不同浓度点的代号F. Vial Pos：设定样品瓶在进样器中的位置Position: A:1-A:40, B:1-B:40,C:1-C:40, D:1-D:40. E:1-E:40;G. Inj V ol：From AS2.6.2 样品分析A.运行单个样品，在Sequence列表中鼠标点击选择需要运行的样品，单击按钮，设定样品运行结束后仪器状态After Sequence Set System (On，仪器仍在扫描状态，Standby，仪器处在待机状态，Off，仪器关机)，单击OK，开始进样分析；B.运行多个样品: 单击按钮，在Run Rows空格中输入要运行的样品范围(在序列表中的行标, 如1-6)，设定样品运行结束后仪器状态After Sequence Set System (On，仪器仍在扫描状态，Standby，仪器处在待机状态，Off，仪器关机)，单击OK，开始进样分析。
C.通常需要将界面切换到在线监测界面，即点击Status完成界面切换2.7 定量数据处理方法建立2.7.1.点击LC Quan界面下的，点击方法编辑图标，出现Identification界面；2.7.2 设置定量方法A 定义定量方法(内标法，外标法)：单击Option菜单，单击Calibration by, 选择定量方法(内标法, Internal Standard, 或者外标法External Standard), 点击OK;B. 打开一演示数据文件：左下角图谱中右键鼠标，open rawfiles，打开一原始数据文件(在要作定量处理的数据中选择一个,最好是打开一个标样的数据文件)；2.7.3. 设置定量方法(内标法)参数:A. 定量组分的识别Identification参数：设定定量组分的名称Name (点击界面右上角组分(Components)，直接输入该组分名称)，扫描方法Filter (下拉菜单中选择该组分对应的扫描方法)，点击OK，输入保留时间Retention time，点击OK (如果是多组分定量,点击component栏内菜单, 选择add, 输入第二个组分名称,其他参数设定相同)；B. 内标物的识别Identification参数：在component栏内菜单，选择add，直接输入内标物名称, 扫描方法Filter (下拉菜单中选择内标物对应的扫描方法), 点击OK, 输入内标物保留时间Retention time, 点击OK；C. 内标物积分参数设定Peak Detection Algorithm：积分方法，选择ICIS或者Genesis，输入内标物各积分参数, 点击OK；D. 定量组分积分参数设定Peak Detection Algorithm：积分方法，选择ICIS或者Genesis，输入该组分各积分参数, 点击OK；E. 校正曲线Calibration 参数设定：单击Calibration 缺省菜单；F. 点击界面右上角组分(Components) 列表栏内内标物的名称，定义其为内标物：在组分类型Component type 栏内选择ISTD，点击OK；G. 点击界面右上角组分(Components) 列表栏内定量组分的名称，在Target compounds 栏内, ISTD的下拉菜单中选中内标物, 点击OK；H. 标准溶液浓度Levels 设定: 单击Level 缺省菜单，在左侧浓度列表内，Cal Level列内从上到下依次输入每个浓度的代号(如1, 2, 3 ···, 或cal-1, cal-2, cal-3 ···,或者A, B, C ···等)，Amount 列内从上到下依次输入各标准溶液浓度值，单击OK，定量方法(内标法)建立完成；I. 保存方法2.7.4.设置定量方法(外标法)参数：A. 定量组分的识别Identification 参数：设定定量组分的名称Name (点击界面右上角组分(Components)，直接输入该组分名称)，扫描方法Filter (下拉菜单中选择该组分对应的扫描方法)，点击OK，输入保留时间Retention time，点击OK；(如果是多组分定量,点击界面右上角组分(Components)，选择add，输入第二个组分名称，其他参数设定相同)；B. 定量组分积分参数设定Detection：点击界面右上角组分(Components) 列表栏内定量组分的名称，输入该组分各积分参数，点击OK；C. 校正曲线Calibration参数设定：单击Calibration 缺省菜单，设定各参数。