酸碱度：血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都可使
复合物解离，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。
振荡：适当的机械振荡能增加分子或颗粒间的相互碰撞，
加速抗原抗体的结合反应，但强烈的振荡可使抗原抗体 复合物解离。
杂质和异物：试验介质中如有与反应无关的杂质、异物
存在时，会抑制反应的进行或引起非特异性反应。
原理：将荧光色素标记在抗体或抗原上，与相应的
抗原或抗体特异性结合后，用荧光显微镜观察所标 记的荧光，以分析示踪相应的抗原或抗体的方法 。
荧光素：荧光色素是能产生明显荧光，又能作为染
料使用的有机化合物。最常用的是异硫氰酸荧光素 (FITC)。
荧光抗体染色
染色方法
荧光素
抗抗体
抗 补 体 定
反应系统 已知抗原 （抗体） 待检血清 （抗原）
指示系统
绵羊红 细胞 溶血素
反应结果的判定 如溶血则 为阴性
如不溶血 则为阳性
补体
中和试验
概念：根据抗体能否中和病毒的感染性而建立的免
疫学试验。
原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感染易
感动物、鸡胚或细胞活性。
两种不同的抗原之间
含有共同的抗原决定
其他抗体相结合。
簇，则发生交叉反应 。
反应的二阶段性
第一阶段
抗原与抗体的特异性结 合阶段，此阶段反应快、 仅数秒至数分钟，但不 出现可见反应。
第二阶段
抗原抗体复合物出现可 见反应阶段。此阶段反 应慢、需数分钟、数十 分钟或更久。
敏感性
抗原抗体的结合还具有高度敏感
最适比例与带现象
前 带
后 带
可逆性
抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这种
结 合 是 可 逆 的 ， 结 合 条 件 为 0℃ ～ 40℃ 、
pH4 ～ 9 。如温度超过 60℃或 pH 降到 3 以下，
或加入解离剂时，则抗原抗体复合物又可重
新解离，并且分离后抗原或抗体的性质仍不
改变。
用已知测未知
以能使100%红细胞不发生凝集的血清最大稀释倍数为该血清的HI 滴度，以2的指数表示。
沉淀试验的概念
可溶性抗原与相应
的抗体结合，在适 量电解质存在下， 经过一定时间，形 成肉眼可见的白色 沉淀，称为沉淀试 验。
沉淀试验的类型
环状沉淀试验 琼脂凝胶扩散试验 免疫电泳
环状沉淀试验
方法：在小口径试管中进行。
1.样本稀释
2.加样 3.温育 4.洗涤 5.加酶标二抗 6.温育
7.洗涤
8.加底物 9.避光显色 10.终止反应 11.结果测定
所有的血清学试验都
是用已知抗原测定未
知抗体，或用已知抗
体测定未知抗原。
影响血清学试验的因素
电解质： 血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，
才出现可见反应。0.9%氯化钠溶液。8-10%
温度： 在一定温度范围内，温度越高，抗原、抗体
分子运动速度越快，这可以增加其碰撞的机会，加速 抗原抗体结合和反应现象的出现 。

血清学试验的类型
凝集试验
沉淀试验 补体结合试验 中和试验 免疫标记技术
凝集试验的概念
细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附
在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的
可溶性抗原，与相应抗体结合后，在 有适量电解质存在下，经过一定时间， 复合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集 团块，称为凝集试验。
凝集试验的类型
举例
IBDV
9～11d鸡胚
24～48h 鸡胚死亡 鸡胚不死亡
IBDV +抗血清
9～11d鸡胚
免疫标记技术
抗原与抗体结合了，但复
合物小，不能通过凝集或 沉淀用肉眼观察到。
该怎么办？
将抗体或抗原联结在一个特定
的易于检测的物质上，通过检
测特定物质的存在，间接反映 抗原抗体发生了结合。
荧光抗体标记技术


间接凝集试验
概念：
将可溶性抗原或抗体与载
类型：
间接血凝试验 乳胶凝集试验 协同凝集试验
体连接后，再与相应的抗 体或抗原作用，所出现的 特异性凝集反应为间接凝 集试验。
间接血凝试验原理
红细胞
抗原
致敏红细胞
被检抗体
致敏红细胞
红细胞凝集





凝集强度判定 ＋ （100%红细胞凝集）：边缘不整齐，有红色颗粒布满孔底） ± （50%红细胞凝集）V型孔：孔底可见红色颗粒，中央有少量 红细胞沉淀 － 红细胞呈点状沉于孔底，无红色颗粒。 能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，为该病毒的红细胞 凝集滴度，即一个凝集单位。如表18-1-1的病毒血凝滴度为27， 即将病毒原液作27倍稀释，其中含一个血凝单位的病毒。 由于病毒血凝抑制试验中需要的病毒液应含4个血凝单位，因此， 需要对原病毒液进行25倍稀释。
原理：试管内，下层沉淀素与
上层沉淀原在液界面应形成白 色沉淀环。
用途：主要用于抗原的定性试
沉淀原
白色沉淀环
沉淀素
验，如炭疽杆菌的 Ascoli 试验、 链球菌的血清型鉴定、血迹鉴 定等。
琼脂凝胶扩散试验
原理
1%琼脂凝胶孔径为 85nm，能使许多可溶性抗
原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝
胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成
沉淀线。
琼脂凝胶扩散试验类型
单向单扩散
单向双扩散
双向单扩散
双向双扩散 方法 用途
双向双扩散方法
此法系采用1%琼脂倒于平皿或玻片上，
制成凝胶板，可按需要打孔。将抗原、
抗体分别滴入孔内，放置湿盒中，在
37˚C湿箱中24-72h后观察。


双向双扩散用途
试验方法 间接法：用于测定 抗体 夹心法：用于测定 大分子抗原 双夹心法：用于测 定大分子抗原
酶联免疫吸附试验应用
目前已广泛于应用多种细菌病和病毒病
的诊断和检测。如猪传染性胃肠炎、鸡
新城疫、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬
病、蓝舌病、蓝耳病、猪瘟、口蹄疫等 传染病的诊断和抗体监测常用此技术。
方法：
抗原的比较和鉴定：在抗原 与抗体孔间形成沉淀带。每 一种抗原成分出现一条沉淀 带。如两个相邻孔之间抗原 相同，则沉淀带融合，如1、 2；抗原不同，则互相交叉， 如3；部分相同则部分融合， 另外不同部分则交叉，如4。
免疫电泳
免疫电泳技术是把凝胶扩散
试验与电泳技术相结合的免 疫检测技术。即将琼脂扩散 置于直流电场中进行，让电 流来加速抗原与抗体的扩散 并规定其扩散方向，在比例 合适处形成可见的沉淀带。
性的特点，不仅可检测定性，还 可以定量检测微量、极微量的抗
原或抗体。


抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现肉眼可见反应。抗体 除IgM是5价，SIgA 4价外，一般抗体都含有两个结合位点（二 价）；抗原则根据分子大小，有10～50个不等的结合点。当抗 原抗体比例适当时，两者结合后，尚有未饱和的结合点，可以 继续与游离的抗体、抗原或与抗原抗体结合物的未饱和点相联 结，逐渐形成愈来愈大的复合物，出现了肉眼可见反应。比例 最适合，出现反应最快，反应产物愈多。 如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的聚合一开始时即达 到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻抗原、抗体结合， 不出现可见反应，谓之带现象。
方法：在试管中进行。 特点：准确、耗时。 用途：定量试验，如
诊断布氏杆菌病，测 定抗体的凝集价。

结果判定 结果用“+”表示反应强度。 ++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底。


+++ ：液体透明，菌体基本被凝集沉于管底。
++ ：液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀。 + ：液体透明度不明显或不透明，有不明显的沉淀或有沉淀的痕迹。 — ：液体不透明，呈均匀混浊，管底无凝集。有时有少量菌体集中于管底中 心，呈脐状，但振摇时，立即散开呈均匀浑浊。 以出现“++”的最高血清稀释倍数即为该份血清的效价，又叫凝集价。大动物 （马，牛，骆驼等）以凝集价1：100以上判为阳性，1：50的凝集价判为可 疑。中小动物（猪，羊，狗等）以凝集价1：50以上判为阳性，1：25的凝集 价判为可疑。 如对照管不符合要求时，试管须废弃重做。
抗体
抗 原 直接法
间接法 抗补体法
酶标抗体技术
原理：将酶分子标记在抗体或抗原分子上，
利用抗原抗体反应的特异性及酶的高催化活
性进行检测。
用于标记的酶：辣根过氧化物酶（HRP ）、碱
性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。

酶标抗体技术分类
免疫酶组织化学染色技术 酶联免疫吸附试验 斑点-酶联免疫吸附试验
直接凝集试验
间接凝集试验
直接凝集试验
概念：颗粒性抗原与相应抗体在电解质的
参与下，直接结合，凝集成团的现象，
称直接凝集试验。
类型：按其操作方法可分为玻片法和试管
法。
1．玻片凝集试验
方法：在玻璃板或瓷
片上进行。 特点：简单、快速。 用途：定性试验，如 细菌鉴定、血型鉴定 等。
2．试管凝集试验
酶联免疫吸附试验
原理
通过化学方法将酶与抗体结合
起来。酶标记后的抗体仍然保 持着能与相应抗原结合的免疫 学活性及酶的催化活性。酶标 抗体与抗原结合后，形成酶标 抗体-抗原复合物。复合物上的 酶，在遇到相应的底物时，催 化底物分解，使底物中的供氧 体由无色的还原型变成有色的 氧化型，呈现颜色反应，用肉 眼或酶标仪判定结果。
血清学诊断
血清学试验的概念
由于抗体主要存在于
血清中，所以将体外