1.为什么TALEN和CAS9技术移码敲除项目需通过测序判定基因型？
TALEN和CAS9技术是通过特异识别和核酸酶切割，使DNA双链断开，机体启动DNA损伤修复机制，在非同源末端连接修复过程中，碱基的随机增减造成目标基因功能缺失。

这一修复过程通常会产生1-30个左右的碱基缺失，PCR后凝胶电泳无法将碱基缺失链和wt链区分开，所以只能通过测序判断。

2.如何判断TALEN和CAS9技术移码敲除项目的基因型？
a. 野生型或基因敲除的纯合子基因型的判定：
1）如下图所示,只有单峰的为野生型或基因敲除的纯合子。

2）将只有单峰的序列文件与wt序列比对，可判定野生型或基因敲除的纯合子基因型（网站或生物软件比对均可）.
如下图的对比结果为野生型：
如下图的比对结果为缺失一个C的纯合子
b.杂合子基因型的判定：
1).如下图所示，测序图谱中出现叠峰的为杂合子
若将叠峰的序列文件直接与wt序列比对，叠峰后的序列会对应不上(因为叠峰的序列只显示了信号强一点的那个碱基，实际上每个叠峰对应两个碱基)，如下图所示：
所以不能通过直接比对来分析，需通过峰图分析，在峰图中峰的颜色与碱基对应关系如下：A：绿色
T：红色
C：蓝色
G：黑色
2)将wt的峰图与杂合子的峰图用软件同时打开，从出现叠峰的位置开始分析（杂合子的一条链是wt链，一条链是缺失链）：
上图第一个峰图是野生型的序列，与第二个峰图叠峰开始对应的序列为：
Gttaact ccgagcagcaaagaaatgatgtccc
上图第二个峰图是杂合子的测序峰图，从叠峰位置开始的序列为：
Gttaact ccgagcagcaaagaaatgatgtccc（wt链）
Ccgagcagcaaagaaatgatgtcccaagcctt（缺失链）
由此可判定为该杂合子的基因型为缺失gttaact（-7）。