30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide 100mL将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。

0.45µm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。

严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。

使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。

如有沉淀，可以过滤。

【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。

称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。

5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液----- 5×Tris-Glycine buffer （SDS-PAGE电泳缓冲液）称取15.0gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。

得0.125mol/L Tris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。

临用前稀释5倍。

【保存条件】室温保存，两年有效。

【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。

电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS 配制20mL【组分浓度】10%(w/v)SDS【配制方法】称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害，请注意防护。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法膜转移缓冲液(Transfer Buffer)配方一：takara称取2.9g甘氨酸（glycine），5.8gTris碱，0.37g SDS溶于约600mL的去离子水，充分搅拌溶解，定容至800mL后，并加入200ml甲醇，摇晃混匀，室温保存。

【保存条件】室温保存【注意事项】1 SDS妨碍蛋白与膜的结合，特别是对小蛋白更是如此，因此，对于小分子的蛋白，电转移缓冲液中可以不加SDS。

2保持20%的甲醇浓度摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法膜转移缓冲液(Transfer Buffer)(pH8.5)配方二：cell signal先配制1M Tris base (MW:121.1) 100ml: 12.1g Tris base + ddH2O至100ml,PH约111M 12.5ml Tris base + 7.5g glycine(MW:75.05) +100ml methanol+ ddH2O 至400ml,调好PH值8.5, 再加ddH2O至500ml. 先置于4℃保存备用。

【保存条件】4℃保存【注意事项】1 SDS妨碍蛋白与膜的结合，特别是对小蛋白更是如此，因此，对于小分子的蛋白，电转移缓冲液中可以不加SDS。

2保持20%的甲醇浓度摘自Cell signal Technology Protocol/support/protocols/Western.html1MTris-HCL（pH6.8）配制10mL【组分浓度】1MTris-HCL【配制方法】称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

【保存条件】室温保存。

【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法1.5MTris-HCL（pH8.8）配制20mL【组分浓度】1.5MTris-HCL【配制方法】1L称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL 混合，加水稀释到100ml终体积。

过滤后40C保存。

）【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法5×SDS-PAGE加样缓冲液----- 5×SDS-PAGE Loading Buffer 需要3ml【组分浓度】0.25MTris-HCL(pH6.8)；10%(W/V)SDS；0.5%(W/V) BPB(溴酚蓝)；50%(V/V) 甘油；5%(W/V)β-巯基乙醇(2-ME)量取1.25mL 1MTris-HCL（pH6.8），0.5g SDS，25mg BPB，2.5mL甘油，置于10mL塑料离心管中，加去离子水溶解后，定容至5mL，小份（0.5mL/份）分装，于室温保存。

使用前将25μL的2-ME加入到每小份中。

加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。

【保存条件】-20℃保存，至少一年有效。

【注意事项】SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法10%过硫酸铵溶液-----10%(w/v)AP 1ml【组分浓度】10%(w/v) 过硫酸铵【配制方法】称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管，加1ml去离子水吹打溶解，4℃保存【保存条件】4℃保存【注意事项】10%过硫酸铵溶液在4℃保存时，可使用2周左右，超过期限会失去催化作用一次性称取4、5管过硫酸铵（0.1g/管），使用时加1ml去离子水溶解摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法TBST Buffer【组分浓度】20mMTris-HCL150mM NaCl；0.05%（v/v）Tween 20称量8.8g NaCl , 20ml 1MTris-HCL(pH8.0)置于1L烧杯中，加约800ml的去离子，磁力搅拌30min 充分溶解，加入0.5ml Tween20后充分混匀，去离子水定容至1L，4℃保存【保存条件】4℃保存【注意事项】Tween20 非常粘稠，用枪头不易吸取，请确定加入准确的量摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法10xTBS (concentrated TBS)-- 10X Tris Buffered Saline【组分浓度】200 mM Tris1.37M NaCl(Sodium Chloride)【配制方法】1L称量24.23g Tris base, 80.06g NaCl，加约800 ml 超纯水，用纯HCl调pH 至7.6，定容至 1 L. 【保存条件】【注意事项】摘自Cell signal Technology Protocol/support/protocols/Western.htmlTris Buffered Saline with Tween 20 (TBST-1X)【组分浓度】20mM Tris,137mM Sodium Chloride,量取100ml 10xTBS(pH 7.6)+ 1ml Tween-20，加约900ml去离子水定容至1L【保存条件】4℃保存【注意事项】Tween20 非常粘稠，用枪头不易吸取，请确定加入准确的量(可以称量1ml的质量，依据质量确定所需0.2/0.3/0.4ml), 最好用Tris buffer.配成10%的Tween20母液后使用。

摘自Cell signal Technology Protocol/products/9997.html封闭缓冲液-----Blocking Buffer:5%(w/v)脱脂奶粉/TBST Buffer称量5g脱脂奶粉加入到100ml的TBST Buffer中，充分搅拌溶解，4℃保存待用,本封闭液现用现配。

【保存条件】4℃保存【注意事项】本封闭液现用现配摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法一抗稀释液-----Primary Antibody Dilution Buffer【组分浓度】1X TBS, 0.1% Tween-20 with 5% BSA or 5% nonfat dry milk(封闭液)称量1g脱脂奶粉加入到20ml的TBST Buffer中，充分搅拌溶解，4℃保存待用,本封闭液现用现配。

【保存条件】4℃保存【注意事项】本封闭液现用现配1X TBS, 0.1% Tween-20 with 5% BSA or 5% nonfat dry milk as indicated on primary antibody datasheet; for 20 ml, add 2 ml 10X TBS to 18 ml water, mix. Add 1.0 g BSA or nonfat dry milk and mix well. While stirring, add 20 μl Tween-20 (100%).摘自Cell signal Technology Protocol/support/protocols/Western.html二抗稀释液-----TBSTECL工作液显影液和定影液配制：先称量显影液2个组份的总重量，做好记录，写在标签上。

显影液配制：1瓶显影液可以配制1L，1月内有效，根据实验需要每次配100ml称取1/10重小袋粉，溶于约60ml 50℃温水中，小袋粉溶解后溶液呈淡粉红色再称取1/10重量的大袋粉，溶于其中，定容至100ml，液体略显黄色显影液配好后，棕色瓶4℃避光保存，刚开始略显黄色，如果液体变成黄褐色即失效，需重新配制。

定影液配制：称取定影粉重量的1/10，溶解于25℃温水100ml中，棕色瓶4℃避光保存。