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常用实验试剂配制

1DEPC水(1‰) 1000ml 水1ml DEPC根据需要确定要配的体积,泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用,泡24小时。

配液体的DEPC水37℃过夜,送至高压,然后配相关溶液。

20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris1000ml DEPC水用HCL调ph至7.5,高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)将溶液持续加热至60℃左右,搅拌之至完全溶解,注意温度不要超过65℃,否则PFA降解失效。

30.2% 甘油/0.1M tris20ml 甘油980ml 0.1Mtris4 20XSSC Nacl 175.3g(ph 7.0)柠檬酸钠88.2gDEPC水1000ml分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用5 HEPES 溶液HEPES 23.8g(ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml6 50X Denhaldt′s 液聚蔗糖(Ficoll 400)0.2g聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g牛血清蛋白(BSA)0.2gDEPC 水20ml7 预杂交bufferDeinoized formanmid 5ml20X SSC 1.5ml1M HEPES 0.5ml50X Denhanldt′s液1ml龟精DNA 0.6ml(4ug/ul)DEPC水 1.4ml龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性,随即冰浴。

杂交buffer分装后-20℃保存。

8Washing buffer(ph7.5) maleic acid 5.8gNACL 4.4gTween(吐温) 1.5ml定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween9Maleic acid buffer(ph7.5) Maleic acid 5.8gNacl 4.4g定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl10Detection buffer(ph 9.5)0.1M Tris-Hcl 7.9g (9.0g)0.1M Nacl 2.9g定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1M Tris-Hcl ,0.1M nacl.11blocking reagent(封闭液)(2-8℃保存)(bottle 5) 5gmaleic acid buffer 50ml12blocking solution封闭液(新鲜配制)1mlMaleic acid buffer 10ml13抗体(AP)10000rpm离心5min,吸上清,1:5000稀释,考虑先稀释100倍,用时再稀释。

✧LB培养基加去离子水950ml搅拌使之完全溶解,用5mol/L的NaOH调PH值至7.0,定容至1L,高压蒸汽灭菌(15磅,1.034×105Pa)30min,4℃保存。

✧LB高压蒸汽灭菌(15磅,1.034×105 Pa) 30 min,冷却至60℃,加入500 L 100mg/mL的氨苄青霉素(Amp),分铺20个平板。

✧100 mg/mL用0.2um✧用0.2um滤器过滤,-20℃储存。

琼脂糖凝胶电泳所用试剂✧50×TAE(电泳缓冲液)Tris碱242g冰乙酸57.1 mL0.5M EDTA(pH 8.0)100 mL溶于终体积1000 mL去离子水中,使用时1:50稀释。

✧10×加样缓冲液0.25% 溴酚兰0.25% 二甲苯青30% 甘油保存于4℃。

✧10mg/mL EB 溶液取溴化乙锭(EB)0.2g溶解于20mL去离子水中,混匀。

4℃避光保存。

使用时终浓度为0.5μg/mL。

✧1%琼脂糖凝胶琼脂糖1g1×TAE 100 mL微波炉加热至完全溶解,摇匀,当温度降至60℃时,即可铺制平板。

✓0.1mol CaCl2溶液:1.1g无水氯化钙,溶于90ml三蒸水中,定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌置于灭菌试剂瓶中,4℃保✓氨苄青霉素(Amp)选择性培养基LB培养基中加入1.5%的琼脂(15g/L),高压灭菌20min,取出,在无菌条件下,冷却至50℃左右时(烧手但尚可忍受)加入抗生素或其他必需成分,如为氨苄青霉素(Amp)选择性培养基,则以50mg/ml的氨苄青霉素贮存液按50μg/ml的量加入,即每ml培养基加入1μl氨基苄。

✓氨苄贮存液将氨苄青霉素钠溶于三蒸水,配成50mg/ml溶液,以0.22μm滤纸过滤,1ml一份分装,存于-20℃。

质粒的少量提取【试剂及配制】1.溶液Ⅰ葡萄糖(C6H12O6·H2O)1.982g三蒸水160ml0.5mol EDTA pH8.0 4ml1mol Tris-Cl pH8.0 5ml以三蒸水定容至200ml,高压灭菌,4℃保存0.5 mol EDTA pH8.0 的配制:Na2EDTA·H2O 186.1g (如无水,则为175g)三蒸水700ml边磁力搅拌边加入固体NaOH,缓慢少量加入,待充分溶解,pH接近8.0,用酸度计调节pH8.0 (HCl/NaOH);1mol Tris-Cl pH8.0 的配制:Tris 碱121g三蒸水800ml充分搅拌,用浓盐酸将pH调节至8.0,酸度计测量;2.溶液Ⅱ配制50ml的量,现用现配。

10 mol NaOH 1ml三蒸水40ml10% SDS 5ml用三蒸水定容至50ml10mol NaOH 的配制:40g NaOH晶体加三蒸水至100ml;10% SDS 的配制:戴口罩,称10g SDS,溶于80ml三蒸水中,68℃助溶,加数滴1mol HCl,调pH7.2,定容至100ml;1mol HCl 的配制:于通风橱中,三蒸水91.4ml,浓盐酸8.6ml,混匀;3.溶液Ⅲ5mol 乙酸钾60ml冰乙酸11.5ml三蒸水28.5ml高压灭菌,4℃保存;5mol 乙酸钾配制:200ml乙酸钾98.14g三蒸水160ml搅拌溶解,定容至200ml;4.3ml 乙酸钠(NaAc)pH5.2配制:500ml乙酸钠(CH3COONa·H2O)201.1g三蒸水200ml用冰乙酸调节pH为5.2,三蒸水定容至500ml,高压灭菌,4℃保存。

5.平衡酚在粗酚中加入0.1% 8-巯基喹啉,然后倒入0.1mol Tris-Cl pH8.0,避光磁力搅拌4h,静置后移去水相,再加0.1mol Tris-Cl pH8.0,搅拌、去除水相,反复进行,直到水相pH>7.8时为止,装棕色瓶,4℃保存。

6.TE 缓冲液pH8.0配制最终使:10mmol Tris-Cl pH8.01mmol EDTA pH8.07.其它试剂:氯仿:乙戊醇(V/V=24:1)、无水乙醇、70%乙醇✓2× SSC先配制20× SSC贮存液,用时稀释。

NaCl 175g 3mol枸椽酸三钠·2H2O 88g 0.3mol三蒸水加至1000ml,用1mol HCl 调pH7.0✓4× SSC/50%去离子甲酰胺(V/V)去离子甲酰胺的配制:500ml 甲酰胺与25g Bio-Rad AG 501-X8(20~50目) 混合,室温避光搅拌4h,过滤,分装为50ml ,-20℃存放;✓100× Denhardt液聚蔗糖10g聚乙烯吡咯烷酮10g牛血清白蛋白10g消毒三蒸水定容至100ml✓预杂交液去离子甲酰胺5ml20× SSC 2.5ml加温至50℃,加入硫酸葡聚糖1g聚合物溶解后,加入100× Denhardt 500μl10%SDS 500μl10mg/ml变性鲱鱼精子DNA 100μl消毒三蒸水400μl充分混合;杂交液将标记好的探针用沸水浴10min,立即冰酒精冷轧,用预杂交液将探针稀释至0.5~5ng/μl 。

原位杂交缓冲液的配制:3%柠檬酸:100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7.H2O)3g,PH2.0左右2×SSC---1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g,柠檬酸三钠(C6H5O7Na3.2H2O,分子量294)8.8g0.5×SSC---300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可(1:3)0.2×SSC---270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可(1:9)20%甘油---20ml甘油加80ml蒸馏水即可0.5M TBS---1000ml蒸馏水加氯化钠30g,TRIS 1.2g 纯乙酸0.4-0.5ml,PH7.2-7.60.01M TBS(PH9.0-9.5)配法:1000ml蒸馏水中加NaCL9g, Tris 1.2g免疫组化缓冲液的配制:10.2M PB①0.2M NaH2PO4:NaH2PO4.2H2O 31.2g(或NaH2PO4.H2O 27.6g)加重蒸水1000ml②0.2M Na2HPO4:Na2HPO4.12H2O71.632g(或NaH2PO4.7H2O 53.6g或NaH2PO4.2H2O 35.6g)加重蒸水1000ml③0.2M PB:19ml①+81ml②混合即可,pH值约为7.4-7.520.01M PBSNaCl8.5-9g, 0.2M PB 50ml,加重蒸水1000ml混匀即可30.5M TBS①0.5M Tris-HCl缓冲液:Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g1N HCl 约420ml重蒸水至1000ml先用少量重蒸水300-500ml溶解Tris(三羟甲基氨基甲烷),加入HCl后,用1N NaOH 或HCl 将pH调至7.6,最后加重蒸水至1000ml,此液为储备液,于4℃冰箱中保存,免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05M,用时取储备液稀释10倍即可。

主要用于配制Tris缓冲生理盐水(TBS)、DAB显色液等4Tris缓冲生理盐水(TBS)0.5M Tris-HCl缓冲液100mlNaCl 3.5-9g(0.15M)重蒸水至1000ml先以重蒸水少许溶解NaCl,再加Tris-HCl缓冲液,最后加重蒸水1000ml,最终浓度为0.05M。

电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的配置电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的配置电泳缓冲液50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水242g57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L染料1%溴酚蓝(bromophenol blue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

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