新版药典微生物检测培养基介绍
2015版中国药典微生物相关内容
6个检查法：
• • • • • • 通则 1101 无菌检查法 通则 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 通则 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查 通则 1107 非无菌药品微生物限度标准 通则 1121 抑菌效力检查法----适用范围 通则 1421 灭菌法 （未修订）
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培养基的质量控制
培养基污染控制 • 从每批制备好的培养基中选取部分样品进行污染测试。
培养基促生长实验 • • 使用质控菌株检测培养基的生长能力，抑制能力和特异性。 测试菌株
− 菌落计数 − 具有典型反应的阳性的菌株； − 微弱生长的阳性菌株（对培养基中选择剂敏感性强的菌株） − 非特异性菌株。（如：产生不同发酵反应和荧光反应的菌株） − 阴性菌株。
预制培养基
100ml,200ml瓶装 测菌片
生物指示剂
辅助工具
鉴定试剂盒 厌氧发生器
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默克德国培养基工厂
默克培养基工厂位于德国Darmstadt ，1892建厂，>7500员工。
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可靠的质量保证
Raw material
Inspected and QA released
Manufacturing
麦康凯肉汤 麦康凯琼脂 RV沙门菌增菌肉汤 木糖赖氨酸脱氧胆酸琼脂 三糖铁琼脂培养基 溴化十六烷基三甲铵琼脂
沙门菌
铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌
甘露醇氯化钠琼脂
梭菌
梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基
白色念珠菌
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新版药典无菌检查培养基
2010版中国药典 硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁培养基 选择性培养基 营养肉汤培养基 营养琼脂培养基 改良马丁琼脂培养基 2015版中国药典 硫乙醇酸盐流体培养基 胰酪大豆胨肉汤 选择性培养基 0.5%葡萄糖肉汤培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基
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称量与溶解
称量培养基时，应戴上口罩，防止在称量过程中扬起的粉末对操 作人员的健康造成影响。 严格按照说明书称量，避免在湿度过高的环境下操作，防止培养 基受潮； 加水溶解后，应适当加热并搅拌，加快培养基的溶解。
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培养基配制用水
采用蒸馏水或相同质量的水，以排除测试条件下抑制或影响微生物生长 的物质； 如果蒸馏水是用氯消毒的水制备的，蒸馏前应先对氯进行中和 离子过滤器生产的去离子水，微生物含量过高，这种水在过滤除菌后仍 可能含有细菌的生长抑制物质. pH 5.5-7.5，否则可能造成培养基颜色异常、产生沉淀或凝胶强度下降。 储存于惰性容器（如：玻璃、聚乙烯材质容器）中，容器应清洗干净， 防止抑制剂残留。
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培养
需氧培养时，每叠建议放置六块平板，平板间要留有空隙以保证空气流 通，使培养物的温度尽快与培养箱温度达到一致。 液体培养基温度达到一致取决于很多因素，如体积、内容物量、容器类 型、培养箱类型等，如有特殊要求应先将液体培养基预热至所需温度再 接种。 厌氧培养时，需要使用厌氧发生器和厌氧指示剂。
Component traceability
QC tests
Sterilization
QA tests
Mfg parameters and in-process tests record
Test results record
Sterilization parameters record
Test results record
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灭菌后培养基的保存
经过高压灭菌的培养基应尽量减少重加热时间，避免过度加热。 培养基融化后放入47±2℃的恒温水浴锅中保温，直至使用，放置时间 一般不应超过4h。 未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培养基尤其应该注 意，融化后时间应尽量缩短； 培养基应该在避光、干燥的环境中保存，必要时建议在4° - 12°C (适宜温度 12°C)避光保存，在没有说明的前提下，建议平板保存不超 过1周; 平板 出现脱水, 裂缝, 脱色 或微生物污染现象时，应丢弃;
检查与称量 密封性、日期、 说明、配方 溶化(水化) 蒸馏水、加热 惰性容器、＜ 500mL pH±0.2 1 M NaOH or 1 M HCl 商品化的培养基不需调节pH
测定及矫正PH
分装
灭菌 121℃, 15 min. 无菌检验、性能检验
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干粉培养基的保存
遵循先进先出的原则 保存开封的记录 超过保质期的培养基需丢弃 开盖后密封，低于25℃保存 储存时避免吸水，氧化，污染
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 梭菌
白色念珠菌
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培养基的质量控制
商品化的培养基需要求厂家提供相应的检测报告（COA）。可以不做污 染测试和促生长实验，但必须做方法适用性试验。
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默克密理博培养基产品
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培养基系列
300多种应用于制药食品微 生物检测培养基，颗粒状保 证安全
颗粒化干粉培养基
90mm,75mm，55mm培养皿
• • SN/T1538.1-2005：实验室培养基制备质量保证通则。 SN/T 1538.2-2007：培养基性能测试实用指南。
GB 4789.28-2013 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求
WS/T 232-2002 商业性微生物培养基质量检验规程
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培养基配制及注意事项
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培养基配制的基本程序
新版药典微生物检测的特点
• 采用更优良的培养基进行相应检验。 • 方法适用性试验模拟样品污染微生物后进行方法试验性验证。 • 计数方法的多样性。 • 结果判定以变化范围进行规定，符合微生物计数规律。 • 更新试验环境的要求。 • 方法适用性试验增加供试品对照组 • 微生物限度标准
新版药典微生物检验方法的更新，基于2010年版《中国药典》。更新后与ICH协调 案方法即现行的USP、EP、JP接轨，同时兼顾了中国的国情。
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培养基适用性检查测试指标
控制菌检查 耐胆盐革兰阴性菌 紫红胆盐葡萄糖琼脂 麦康凯肉汤 大肠埃希菌 麦康凯琼脂 RV沙门菌增菌肉汤 沙门菌 培养基 肠道菌增菌肉汤 特性 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 试验菌株 大肠埃希菌/铜绿假单胞菌 金黄色葡萄菌 大肠埃希菌/铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄菌 大肠埃希菌 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 生孢梭菌 生孢梭菌 白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 大肠埃希菌
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新版药典制药用水微生物限度培养基
制药用水 纯化水 2010版中国药典 营养琼脂 玫瑰红纳琼脂 营养琼脂 玫瑰红纳琼脂 2015版中国药典 R2A培养基
注射用水
R2A培养基
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培养基的质量控制
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国际通用的培养基质控标准
ISO/TS 11133食品和动物饲料的微生物学培养基生产和制备指南
• • 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则（2000/2009）。 第2部分：培养基性能检验的实用指南 （2003）。
2015版中国药典
肠道菌增菌肉汤培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂
大肠埃杆菌
胆盐乳糖培养基 MUG培养基 曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂 营养肉汤 四硫磺酸钠绿培养基 胆盐硫乳琼脂或沙门、志贺氏属琼脂 曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂 胆盐乳糖培养基 溴化十六烷基三甲铵琼脂 绿脓菌素测定培养基 亚碲酸盐肉汤培养基 卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇盐琼脂 梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基 吐温80玉米琼脂培养基
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培养基相关文件
无疯牛病或口蹄疫的证明（ BSE/TSE – Certificate ）
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培养基相关文件
COA 应用说明
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默克密理博
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培养基的分装
储存于惰性容器（如：玻璃、聚乙烯材质容器）中； 将培养的培养基分装至容器中，培养基的体积不超过所用容器的3/5； 培养基灭菌时，总体积应小于1000ml；
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培养基pH值的测定
灭菌前后测定培养基的pH值； pH ±0.2； 1 mol/L的 NaOH 或 Hcl来调整pH值； 商品化的培养基一般不需要调整pH值，但需测定pH是否在规定范围内；
促生长能力 抑制能力 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 促生长能力+指示特性 三糖铁琼脂培养基 指示能力 溴化十六烷基三甲铵琼脂 甘露醇氯化钠琼脂 梭菌增菌培养基 哥伦比亚琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 念珠菌显色培养基 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 抑制能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力+指示特性 促生长能力+指示能力 抑制能力
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新版药典微生物限度——微生物计数法培养基
2010版中国药典 营养琼脂 营养肉汤 玫瑰红钠琼脂培养基 2015版中国药典 胰酪大豆胨肉汤 胰酪大豆胨琼脂培养基 沙氏葡萄糖琼脂 沙氏葡萄糖肉汤 马铃薯葡萄糖琼脂 玫瑰红钠琼脂培养基
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新版药典微生物限度——控制菌检查法培养基
控制菌
耐胆盐格兰阴性菌
2010版中国药典
6个指导原则：
• • • • • •
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通则9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则（未修订） 通则9202 非无菌药品微生物限度指导原则（修订） 通则9203 药品微生物实验室质量管理指导原则（修订） 通则9204 微生物鉴定指导原则（新增） 通则9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则（新增） 通则9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则（新增）