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第六章细菌对抗菌药物敏感性与耐药性


椭圆形 细菌生长 抑制区 判读抑菌浓度 (MIC ug/ml)
8 016
第二节 抗菌药物敏感试验
四、 E-test法
1.菌液制备及接种均同纸片扩散法
2.于90mm平板上可放E试验试条1 ~ 2条,140mm平板最多可放6条
3. 孵育、温度及时间同纸片扩散法
4.读取椭圆形抑菌环与E试条的交界 点值即为MIC
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0.1ml分别接种于含药培养基和对照培养基斜面。37℃培养,四周观
察结果
第三节 分枝杆菌的药物敏感试验
二、 体外药敏试验—绝对浓度法
5.结果报告 按下列方式报告对照培养基及含药培养基菌落情 况:
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第四节 细菌的耐药性检查
一、细菌耐药性与耐药机制
1.产生一种或多种水解酶、钝化酶和修饰酶 2.抗菌药物作用靶位改变,包括青霉素结合蛋白位点、DNA解旋酶、 DNA拓扑异构酶Ⅳ的改变等
二、纸片扩散法
3.用无菌棉拭子蘸取菌液,在试管内壁旋转挤去多余菌液 4.在MH琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板60度,最后 沿平板内缘涂抹1周 5.平板在室温下干燥3~5min,用无菌镊子或纸片分配器将含 药纸片紧贴于琼脂表面,各纸片中心距离应大于24mm,纸片距平 板内缘大于15mm
第二节 抗菌药物敏感试验
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第三节 分枝杆菌的药物敏感试验
一、结核分枝杆菌体外药敏试验指征
首次从患者标本分离的分枝杆菌需做药敏试验,有助于临 床合理用药和监测其药物敏感性。经过三个月正规抗结核治疗,
标本中分枝杆菌分离培养仍为阳性的患者或重症患者,以及来
自高耐药结核分枝杆菌流行区的患者,均须做体外药敏试验。
第三节 分枝杆菌的药物敏感试验
微生物学检验
国家卫生和计划生育委员会规划教材
《微生物学检验》
第六章
细菌对抗菌药物敏感性与耐药性
本 章 内 容
1 2 3
第一节 临床常用抗菌药物 第二节 抗菌药物敏感试验 第三节 分枝杆菌的药物敏感试验
第四节 细菌的耐药性检查
4
学习目标
学习目标:
1.掌握 抗菌药物敏感试验常用方法,纸片扩散法(K-B法) 的操作方法、结果判断及实验质量影响因素 2.熟悉 耐药表型检测;β -内酰胺酶检测方法;超广谱β -内 酰胺酶(ESBLs)检测方法 3.了解 临床常用抗菌药物种类;药敏试验中药物选择原则
3.抗菌药物渗透障碍,包括细菌生物被膜形成和通道蛋白丢失
4.药物的主动转运系统亢进 上述四种耐药机制中,第一、二种耐药机制具有专一性,第三、四
种耐药机制不具有专一性。
第四节 细菌的耐药性检查
二、耐药表型检测
1.β -内酰胺酶检测 (1)β -内酰胺酶是一类水解青霉素、头孢菌素类抗生素的灭 活酶;该酶位于革兰阳性球菌菌体外,革兰阴性杆菌间质中。
二、纸片扩散法
6.平板置35±2℃孵育箱,16~18小时后判读结果。苛养菌应 在含5%CO2环境中培养20~24小时
7.用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径。按照CLSI标准判读,
报告敏感、中介、耐药
第二节 抗菌药物敏感试验
纸片扩散法图解
敏感
耐药 细菌生长
抑菌圈 药敏纸片
细菌菌落 抗生素浓度
第二节 抗菌药物敏感试验
耐药(R)
菌株不能被常规剂量抗菌药物可到达的浓度所抑制
第二节 抗菌药物敏感试验
二、纸片扩散法
含有定量抗菌药物纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上,纸
片中所含药物吸收琼脂中水分溶解后向纸片周围区域扩散,形成
递减的梯度浓度。纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑 制,形成透明抑菌圈。抑菌圈大小反映测试菌对测定药物的敏感
第一节 临床常用抗菌药物
二、常规药敏试验药物选择原则
我国主要遵循美国临床实验室标准化委员会(CLSI)制定的抗
菌药物选择原则。
A组:包括对特定菌群的常规试验并常规报告的药物; B组:只在A组药物耐药、过敏、无效时选择性报告;
C组:在A、B组药物过敏或耐药时选用;
U组:仅用于治疗泌尿道感染的药物。
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第四节 细菌的耐药性检查
二、耐药表型检测
2.超广谱β -内酰胺酶检测(纸片扩散法) (1)纸片扩散法 表型确证试验
头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻
肟和头孢噻肟/克拉维酸。任一复合药物组的 抑菌圈直径与相应单药抑菌圈直径相差≥5mm
时,即可判断该菌产ESBL
第四节 细菌的耐药性检查
第二节 抗菌药物敏感试验
五、质量控制
1.影响纸片扩散法的因素 (1) 培养基厚度 (2) 细菌浓度 (3) 抗菌药物含量、扩散性 (4) 温度,预孵育时间 (5) 判定标准 (6) 质控标准菌株
第二节 抗菌药物敏感试验
五、质量控制
2.质量控制的要求 (1)质控菌:标准菌株来源国家微生物菌种保藏中心。标 准菌株应每周在MH琼脂上传代一次,4℃保存 (2)质控方法:在同一条件下,将新鲜传代质控菌株用与 常规实验相同的测定药物进行相同的操作方法后,测定质控菌 株的抑菌环,以便对照监测 (3)抑菌圈质控范围:标准菌株的抑菌圈应落在规定范围 内,范围为95%的可信限
第二节 抗菌药物敏感试验
四、E-test法
E-test法(epsilometer test)结合了扩散法和稀释法的原 理和特点,对抗菌药物直接测量MIC。E试条为宽5mm、长50mm的无 孔试剂载体,一面固定有浓度呈连续指数增长的抗菌药物,另一 面有所含药物浓度的刻度
细菌生长区 E test 塑料条 256 128
二、 体外药敏试验—绝对浓度法
1.药物溶液配制 药物先制成高浓度药液,再按比例稀释成低浓 度药液 2.含药培养基 每100ml改良罗氏培养基加入1ml配制、稀释好 的抗结核药液,无菌分装7ml/管,85℃凝固。 3.菌悬液 培养物以0.5%吐温-80生理盐水稀释,与标准麦氏比 浊管No.1比浊 4.接种 1mg/ml菌悬液10倍稀释至10~2mg/ml,无菌吸取菌液
(2)检测方法有微生物培养法、碘-淀粉法、头孢硝噻吩纸
片法。其中头孢硝噻吩纸片法因为简单、方便、快速,应用于临 床检测。
第四节 细菌的耐药性检查
二、耐药表型检测
2.超广谱β -内酰胺酶检测 ESBL指由质粒介导的能水解青霉素类、头孢菌素类和单
环内酰胺类氨曲南的一类酶。
ESBLs不能水解头霉素类和碳青霉烯类药物,能被克拉维
本章重点:★纸片扩散法(K-B法)的操作方法及结果判断
★药敏试验的临床意义
第一节 临床常用抗菌药物
一、抗菌药物分类
1.β -内酰胺类:抑制转糖基酶、转肽酶、D-羧肽酶、 内肽酶,从而细菌细胞壁合成。 2.氨基糖苷类:抑制mRNA的转录和蛋白质的合成。 3.喹诺酮类:作用于DNA旋转酶,干扰细菌DNA复制、修 复和重组。 4.大环内酯类:结合细菌核糖体50S大亚基,抑制细菌
程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系。
第基,pH7.2~7.4,做成琼脂厚度4mm,
直径90mm的平板
2.挑取孵育16~24小时已分纯菌落,置于生理盐水管中,振荡 混匀后校正浓度至0.5麦氏标准
第二节 抗菌药物敏感试验
第二节 抗菌药物敏感试验
一、概述
测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作
用的方法称为抗菌药物敏感试验(AST)
抗菌药物敏感试验方法
纸片扩散法
稀释法
E-test法
第二节 抗菌药物敏感试验
抗菌药物敏感试验结果
敏感(S)
菌株被推荐剂量治疗感染部位可达到的抗菌药物浓度抑制
中介(I)
药物在生理浓集部位有临床效果,还代表敏感与耐药之间缓冲区
酸、舒巴坦和他唑巴坦等内酰胺酶抑制剂所抑制。
第四节 细菌的耐药性检查
二、耐药表型检测
2.超广谱β -内酰胺酶检测 (1)纸片扩散法 表型初筛试验 出现以下一种情况即可怀疑菌株产生ESBL(筛选阳性): 头孢泊肟≤17mm 头孢他啶≤22mm 头孢噻肟≤27mm 头孢曲松≤25mm 氨曲南 ≤27mm
三、稀释法
以一定浓度的抗菌药物与培养基进行一系列不同倍数稀释,经
培养后观察被试菌株的最低抑菌浓度,根据CLSI提供的MIC解释标准
判断细菌对抗菌药物的敏感程度。稀释法中使用肉汤培养基为肉汤 稀释法,使用琼脂培养基为琼脂稀释法
第二节 抗菌药物敏感试验
三、稀释法
1. 肉汤稀释法
浓度
4
8
16
32
64
128
二、耐药表型检测
2.超广谱β -内酰胺酶检测
(2)肉汤稀释法 表型初筛试验 出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL: • 头孢他啶或头孢噻肟或头孢曲松或氨曲南MIC≥2mg /mL

头孢泊肟MIC≥8mg /mL
第四节 细菌的耐药性检查
二、耐药表型检测
2.超广谱β -内酰胺酶检测
(2)肉汤稀释法 表型确证试验 头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟/克 拉维酸,任何一组复合药物组的MIC值比相应单药的MIC降低3个 稀释度者即可判定该菌为产ESBL菌株。
256 μ g/ml


抗菌药物素倍比稀释,接种菌105CFU/ml , 孵育温度35℃, 16~20h,判读结果。
第二节 抗菌药物敏感试验
三、稀释法
2.琼脂稀释法
浓度 16
32
64
128
256 μg/ml
制备含对倍抗生素浓度梯度的平板,制备菌悬液,点种菌, 104/每点,孵育35℃,16~20h ,判读结果
蛋白质合成和肽链延伸。
5.糖肽类:阻断肽聚糖合成,阻阻碍细胞壁合成。
第一节 临床常用抗菌药物
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