实验内容
实验一 影响药物作用的因素 实验二 药物代谢动力学实验 实验三 处方与药物的配伍禁忌 实验四 中毒与解救试验 实验五 药物对离体肠的影响 实验六 抗微生物药物的体外抑菌实验 实验七 生物碱的提取及其药敏实验 实验八 药物对离体心脏的影响
实验六、抗菌药物的体外抑菌实验
【实验目的】
掌握药敏试验的方法，了解药物对常见 菌的作用。 意义： • 体外抗菌试验对临床用药具有参考价值。 • 鉴定新药是否具有抗菌活性。
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【思考题】
•
分别以抑菌圈的大小和MIC值来比较
常见药物对金黄色葡萄球菌的作用强度。
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能够杀灭培养基中细菌的最低浓度。
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【试剂与器材】 细菌菌液（如金黄色葡萄球菌、链球
菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌）、药液（青 霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠、四环素）、 碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、氢氧化 钠、高压灭菌器、小试管、试管架、吸管、 平皿等。 256μ/ml青霉素溶液： 药敏试纸的准备：
二、试管二倍稀释法 取灭菌小试管10支，按照1至10编号，
排列于试管架上。按照无菌操作，从第一 管到第10管，分别加入牛肉膏汤1ml。用吸 管吸取256μ/ml的青霉素溶液1ml放入第一 管，并反复吹匀；接着从第一管吸出1ml放 入第二管同样吹匀后吸出1ml放入第三管， 依次逐管进行稀释到第８管，第10管不加 青霉素液，作细菌对照组，第９管只加药 物，不加菌液，作为药物对照组。
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• 【实验步骤】
• 一、纸片法 以灭菌小棉签取金黄色葡萄球菌液（每
ml约含3亿个细菌），注意不宜蘸取过多， 以刚浸湿整个棉签为度，轻轻地从四个不 同方向平行交叉划线，使菌液均匀涂布于 整个琼脂平板上。同样方法，也可制作大 肠杆菌平板备用。
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金色葡萄球菌
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【注意事项】
1. 接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹；用过的棉 签火焰烧灼后丢弃。
2. 用试管二倍稀释法测MIC值，稀释时注意 稀释的顺序；每次移液前注意清洗吸管。
3. 药敏片之间要间隔适当距离，以免抑菌圈 出现交叉。
4. 四人一组，纸片法每人一个平皿，作四种药物对 一种菌的作用，同组每人所接菌种不同，平皿上 做好记号。结果记录时将本组结果综合。
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试管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
牛肉膏汤 （ml）
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
青霉素（ml） 1 1 1 1 1 1 1 1 弃1 0
葡萄球菌液 （ml）
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0ห้องสมุดไป่ตู้5
0.5
0
0.5
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• 1-8，10各加入培养18 h并用牛肉膏汤稀释至 5×107～108 cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液 0.5ml。放入37℃培养箱内培养24h后，取出 观察细菌生长情况。
二、纸片法
取已经制备好的4种药敏片：青霉素16万u/ml 、 链霉素10万u/ml 、10%磺氨嘧啶钠、四环素0.05g / ml ，放置在已接种细菌的琼脂平板表面的不同区 域。为了位置间隔准确，最好事先在平皿底用蜡 笔作上记号。
将培养皿置37℃培养24h，观察纸片周围有无 抑菌环，并测量抑菌圈的直径，比较各药的抗菌 效力。样例如下图：
• 以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该 细菌的最低抑制浓度（MIC）。
• 最低杀菌浓度（MBC） • 结果记录于下表：
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记录实验结果
管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
稀释倍数
1
1/2
1/4
1/8
1/1 6
1/3 2
1/6 4
1/1 28
1/2 56
0
稀释浓度(u/ml) 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5 －
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实验结果记录：抑菌直径（mm）
药物 细菌
青霉素 （16万 u/ml）
链霉素 （1.0万 u/ml）
磺氨嘧啶钠 (1% )
四环素 (25 %)
金葡菌 链球菌
大肠杆菌 沙门氏杆菌
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【实验原理】
抗菌作用 耐 药性
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【基本原理】
抗菌活性：是指抗菌药抑制或杀灭病原微 生物的能力。
两种测定方法：体外与体内（化学治疗实 验）；
评价指标： （1）最低抑菌浓度（MIC）： 能够抑制培养基中细菌生长的最低
浓度。 （2）最低杀菌浓度（MBC）：