微量肉汤稀释法（borth microdilution method）
实验方法：
1.用无菌蒸馏水在聚丙烯离心管中将抗菌肽和抗生素溶解制成1280 g/L的储备
液，然后用等量无菌的0.02%乙酸（含0.4% BSA）稀释，在用0.01%乙酸（含
0.2% BSA）溶液对等量稀释后的溶液在进行一系列的双倍稀释，得到质量浓
度为640，320，160……1.25 mg/L的共10个梯度的系列稀释液，4 ˚C下保存备用。

2.将待测细菌在灭菌MH肉汤琼脂平板上过夜培养，挑取菌落接种于灭菌试管
中的MH肉汤，37 ˚C，180 r/min过夜培养。

将培养后的菌液稀释至2*10^5-7*10^5 CFU/mL，向无菌的96孔平板中的1-11孔各加入100 µL的菌液，12孔不加入菌液而加入100 µLMH肉汤，然后从1～10孔逐一加入相应的待测抗菌肽，11孔作为扫描对照组不加肽。

37 ˚C，90 r/min培养18-24 h，这样待测抗菌肽的终质量浓度分别为64，32，16，……0.125 mg/L。

（不知道待测抗菌肽添加量是多少，最终抗菌肽的终浓度怎么缩小了10倍）
3.最小抑菌浓度MIC（mininmal inhibitory concentration）就是能阻止50%以上
细菌生长的最小肽浓度。

用酶标仪在490 nm下对平板进行扫描，肽的MIC 的确定按照比对照孔（11孔）的浑浊程度低50%以上的最小质量浓度计算。

4.最小杀菌浓度MBC（minimal bactericidal concentration）就是能抑制任何残
余菌落生长的肽的最低浓度。

从没有细菌生长的平板孔中的内容物中取10 µL 涂布到MH琼脂平板上，37 ˚C培养18 h，以此来确定肽的MBC。

参考文献：
【1】汪以真，抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较[J].中国兽医学报，2004，24（3）：270-273.
抗菌肽的体外抑菌实验（平板法）
1.稀释：将一定效价的抗菌肽做6个浓度的稀释，将抗生素按正常使用剂量同
样做6个浓度的稀释
2.指示菌：指示菌用液体LB培养基培养24 h后稀释至10^6 CFU/mL
3.制板：取1 mL指示菌注入培养皿中，倒入灭菌的固体LB培养基摇匀，放冷
后制成平板。

4.用打孔器打孔法来确定抑菌效果。

参考文献：
李晓营，等.一种抗菌肽的体外抑菌实验、安全性评价及其对肠道菌群的影响[J].广东饲料，2014，23（2）：25-28。