实验原理
已知有97％分离出的大肠杆菌产生葡 萄糖苷酸酶，此酶能使葡萄糖苷酸4-甲基伞形花烯(简称MUG)分解而生 成甲基伞形花酮，在365nm UV照射下 产生特异性蓝色荧光，根据这一原理， 对地面水中大肠杆菌快速检测研究 (简称酶荧光法)
方法一：MUG肉汤 ， Columbia-MUG LST-MUG肉汤 Columbia琼脂培养基， 生理盐水
葡萄糖苷酶
有两种类型：
一．
β-葡萄糖苷酶 （又称β-D-葡萄糖苷水解 （又称β 酶）
β-葡萄糖苷酶广泛存在于自然界中，它可以来源于 葡萄糖苷酶广泛存在于自然界中， 植物、微生物，也可来源于动物。 植物、微生物，也可来源于动物。
用途：在饲料工业上， 用途：在饲料工业上，β-葡萄糖苷酶
通过破解富含纤维的细胞壁，使其包含 通过破解富含纤维的细胞壁， 的蛋白质、 的蛋白质、淀粉等营养物质释放出来并 加以利用， 加以利用，同时又可将纤维降解为可被 畜禽机体消化吸收的还原糖， 畜禽机体消化吸收的还原糖，从而提高 饲料利用率。在食品开发上， 饲料利用率。在食品开发上，其作为特 殊的风味酶已得到应用， 殊的风味酶已得到应用，如李平等将黑 曲霉β 葡萄糖苷酶应用在果汁、茶汁、 曲霉β-葡萄糖苷酶应用在果汁、茶汁、 果酒等制备上，能起到较好的增香效果 果酒等制备上，
葡萄糖苷酸亦可和其他各种产荧光 性试剂结合，因此可供检测微生物 中的葡萄糖苷酶酸酶。而且灵敏度 中的葡萄糖苷酶酸酶。而且灵敏度 高、检测快速、准确性强。
二． α-葡萄糖苷酶抑制剂
α-葡萄糖苷酶抑制剂是一类以延缓 肠道碳水化合物吸收而达到治 疗糖尿病的口服降糖药物。α 疗糖尿病的口服降糖药物。α葡萄糖苷酶抑制剂是比较成熟 的治疗糖尿病药物，能够降低 的治疗糖尿病药物，能够降低 高血糖 。
实验目的
了解葡萄糖甘酶荧光法检测大肠 杆菌的原理 掌握葡萄糖甘酶荧光法检测大肠 杆菌的方法
培养塑料、可调容量加液、1．0（mg／ml） MUG溶液、 细菌增菌培养、乳糖发酵管及 远藤氏培养基。
操作方法
①每个18孔塑料板可测1份三个 不同稀释度的水样。在第1排6 孔加原水1ml，第2排6孔加1／ 10稀释水1ml，第 3 排6孔加1 ／100稀释水 1ml。 ②然后各孔加增菌1ml，除对照 孔外，各加 MUG溶液100µl， 44℃ 培养。 ③紫外线灯观察荧光显示结果
此方法能够对食品中大肠 此方法能够对 杆菌的定量检验，适用于 出口食品(不包括贝类)卫 生质量的监视和出口前的 筛选检验 。
方法二、酶荧光法
材料和器材： 水样来源 采取河水、井水湖水。测定
时，水样均用无菌水稀成3个不同浓度：原 水、1/10稀释水、1/100稀释水。
器材 365nm×8W紫外线灯、18孔细胞
操作步骤：
1. 2. 3.
4. 5.
每个样品选三个连续稀释倍数的稀释液，每个稀释 倍数的稀释液接种三管LST-MUG肉汤，每管1mL。 倍数的稀释液接种三管LST-MUG肉汤，每管1mL。 将接种管于30min内放入36± 将接种管于30min内放入36±1℃水浴或培养箱内， 培养24±2h。 培养24±2h。 将各管培养物拿至暗室，在长波紫外光灯照射下观 察。凡显蓝色荧光的为大肠杆菌阳性。在阳性管上 察。凡显蓝色荧光的为大肠杆菌阳性。在阳性管上 做好标记并记录。 从产气而不显荧光的各管取培养物。划线接种 Columbia-MUG琼脂平板，36± Columbia-MUG琼脂平板，36±1℃培养24±2h。 培养24±2h。 将培养后的Columbia-MUG平板拿至暗室，打开皿 将培养后的Columbia-MUG平板拿至暗室，打开皿 盖，在长波紫外光灯照射下观察有无蓝色荧光。凡 盖，在长波紫外光灯照射下观察有无蓝色荧光。凡 显蓝色荧光的，无论其面积大小，均记为原LST显蓝色荧光的，无论其面积大小，均记为原LSTMUG管培养物为大肠杆菌阳性。 MUG管培养物为大肠杆菌阳性。
仪器 ：
吸管：1mL和10mL，带刻度； 吸管：1mL和10mL，带刻度； 试管：16mm×160mm； 试管：16mm×160mm； 稀释瓶：500mL三角瓶或广口瓶； 稀释瓶：500mL三角瓶或广口瓶； 玻璃珠； 均质器； 水浴箱或培养箱：36± 水浴箱或培养箱：36±1℃； 长波紫外光灯：366mm，功率＜6W。 长波紫外光灯：366mm，功率＜6W。