当前位置:文档之家› 电镜取样及固定液配制

电镜取样及固定液配制

戊二醛最终浓度2.5% 7.2
固定方法:现在磷酸戊二醛固定液中固定24小时,然后换用新的磷酸戊二醛缓冲液永久固定
工具:手术刀两把,镊子两把,锋利的刀片,100ml蓝盖瓶8个
根茎叶取样:最后成熟稳定期取野生型和突变型的根茎叶组织
根:野生型和突变型取相同部位根的相同部位,根尖偏上部位
茎:野生型和突变型取茎相同节间的中间部位(例如第5节茎中间部位),用锋利的刀片切成1cm×0.2cm方块
叶:野生型和突变型取相同叶片的相同部位(例如第5片叶的中间部位),3cm×1cm
磷缓戊二醛固定液:以下两步配成
一、磷酸盐缓冲液配方
A液:0.2M磷酸氢二钠贮备液
磷酸氢二钠Na2HPO4·2H2O 35.61g
或Na2HPO4·7H2O 53.65g
或Na2HPO4·12H2O 71.64g
加双蒸水至1000ml
籽粒取样:
大粒野生型和小粒突变型授粉后分三个时期取样:5天,15天,35天
取样部位:野生型和突变型三个时期各自选取三株,每株取穗轴中部籽粒5-10粒
取样方法:将各个时期所取籽粒的左右两侧和上下两头切掉一部分,留中间部位,切成0.5cm×0.2cm大小(另外可以将各个时期取的样品保留3-5粒种子完整不切开存放在固定液)
B液:0.2M磷酸二氢钠贮备液
磷酸二氢钠NaH2PO4·H2O 27.60g
或NaH2PO4·2H2O 31.21g
加双蒸水至1000ml
C液:0.2M磷酸盐缓冲液:
pH(25℃)
A液
B液
7.2
36ml
14ml
二、磷缓戊二醛固定液配方
C液50mlPH
25%戊二醛溶液10ml 7.2
ห้องสมุดไป่ตู้加蒸馏水至100ml 7.2
相关主题