血球计数板的结构 它是特制的厚载玻片，中央区域有四条凹槽而 形成三个平台，中间平台较宽，它又被一短横 槽分隔为两部分，每一部分均有一个方格网， 每一方格网可分为九个大方格，中央大方格就 是计数室。大方格分为16个中方格，每个中方 格又可分为25个小方格。每个大方格共含有 400个小方格。计数室大方格边长为1mm，底 面积为1mm2，高0.1mm,所以每个计数室固定 容积为0.1mm3。
实验17

微生物细胞数量的镜检计数法
一、实验目的
掌握血球计数板测定微生物细胞数量的 原理。 学习用血球计数板测定微生物细胞数量 的方法。
二、实验原理

利用血球计数板在显微镜下直接计数， 是将菌悬液放入血球计数板与盖玻片之 间的计数室中，然后在显微镜下计数， 因为计数室容积一定，所以可根据测定 值推算出菌悬液单位体积所含微生物的 总数量。
三、实验材料

酵母菌菌悬液
四、实验方法步骤
1 镜检计数室：对计数室进行镜检，若 内有污物，清洗后才能计数。 2 加样液：先在血球计数板两个计数室 部位加盖玻片，再用无菌玻棒或滴管沾 取待测菌悬液稀释液（已摇匀），从盖 玻片边缘滴加，使菌液沿缝隙靠毛细作 用自行进入计数室内。静置5min。

3 显微镜计数：将血球计数板置于载物台上， 先用低倍镜观察，后换高倍镜观察计数。位于 格线上菌体只计上边线和左边线上的，如果出 芽酵母芽体大小达到母细胞一半时，可计作两 个菌体。选择五个视野，在每个视野内任意选 择五个小方格计数，求出每个小方格菌体数量 平均值。 4 根据公式计算每ml菌液含菌数。 5测量完毕后，取下盖玻片用水冲洗血球计数 板（严禁用硬物刷洗），晾干，放入盒内保存。
计数方法

在计数时，用含16个中方格的计数板， 要按对角线方位计数左上、左下、右上、 右下等四个中方格（100个小方格）所含 有的菌数；由此可计算得出每个小方格 所含有的菌数的平均值，计数室每个小 方格容积为：0.1×10-3÷400＝1／ 4×106 (ml)计算公式：每ml菌液含菌 数= N ×K ×d(N：每个小方格含菌数 平均值； d：菌液稀释倍数；K = 4×106)

注意事项
（1）取待测稀释菌悬液向血球计数板加 样前，须将菌悬液充分摇匀。 （2）加样过程中，应避免将菌液滴在盖 玻片 （3）由于菌体在计数室中处于不同空间 位置，须在不同焦距下才能观察到，故 观察时须不断调节微调，计数菌液