一、抗原-抗体反应的特点
1、高度特异性： 抗原表位与抗体分子CDR的互补结合是抗原-抗
体反应的化学本质。
2、表面化学基团的可逆性 抗原与相应抗体除空间构型具有互补性外，
两者主要是通过分子表面的氢键、疏水键、静 电和范德华力非共价结合。
亲合力（avidity）: 指抗体分子的抗原结合部位与抗原表位之间
该法所获细胞纯度高（93%-99%），活细胞率＞95%，比流式细 胞术省时、费用低，操作简单。
3、流式细胞术（flow cytometry）分离法：
是借助荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sorter,FACS）将荧光 抗体标记的细胞进行快速准确鉴定和分类的技术。
粒后，再与相应抗体或抗原进行反应出现的凝集现象。
应用 抗链“O”试验（ASO）—RA）
速率散射比浊/免疫比浊
2、沉淀反应
单向琼脂扩散 琼脂扩散
双向琼脂扩散 对流免疫电泳
免疫电泳技术 火箭免疫电泳
免疫电泳
（1）单向琼脂扩散试验（single agar diffusion）
加速抗原-抗体复合物的形成。 通常抗原-抗体反应的最适温度是37℃。
3.酸碱度 抗原-抗体反应的最适pH值在6-8之间。
pH过高或过低，均可影响抗原或抗体的理化性 状，影响试验的可靠性。
三、抗原-抗体反应类型和检测方法
根据抗原的性质、参与反应的成分和反应呈现的结果， 将抗原-抗体反应分为四类：
1.凝集反应 2.沉淀反应 3.免疫标记技术
mononuclear cells,PBMC）包括淋巴细胞和单核 细胞，它们是免疫学实验中最常用的细胞。
常用的分离方法： 葡聚糖-泛影葡胺（又称淋巴细胞分离液）密
度梯度离心法。
二、淋巴细胞及其亚群的分离
1、免疫吸附分离法（洗淘法）：
将已知抗淋巴细胞表面标志的抗体包被聚苯乙烯培养板，加入淋 巴细胞悬液，使表达相应表面标志的淋巴细胞结合在培养板上，洗脱 后即可获得具有相应表面标志的淋巴细胞。
直接凝集：玻片法、试管法 间接乳胶凝集：ASO试验、RF试验
（一）凝集反应 间接凝集 间接血球凝集： Coombs试验：直接法、间接法
间接凝集抑制试验：免疫妊娠试验
（一）凝集反应：
概念： 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在一定条件下出现肉眼 可见的凝集现象。
类型：
1、直接凝集反应（direct agglutination）
免疫层析技术 — 金标免疫层析法
第三节 免疫细胞的检测
一、免疫细胞的分离 （一）外周血单个核细胞的分离 （二）淋巴细胞及其亚群的分离 1.玻璃粘附分离法 2.尼龙毛分离法 3.E花结分离法 4.免疫吸附分离法（洗淘法） 5.免疫磁珠分离法（IMB法） 6.流式细胞术分离法
一、外周血单个核细胞的分离 外周血单个核细胞（peripheral blood
例 用抗CD4抗体包被聚苯乙烯培养板，可将CD4+T细胞与 CD8+T细胞相分离。
2、免疫磁珠（immune magnetic bead，IMB）分离法：
免疫磁珠由抗淋巴细胞表面标志的抗体与磁性微珠交联结合组成。
将免疫磁珠加入细胞悬液中后，可使表达相应表面标志的淋巴细 胞与之结合。然后，在磁场作用下，结合相应淋巴细胞的免疫磁珠吸 附在靠近磁铁的管壁上。弃去悬液中游离的细胞，将免疫磁珠结合的 细胞分离，即可获得具有某种表面标志的淋巴细胞。
的结合强度
3、适宜的抗原抗体浓度和比例
在一定浓度范围内，二者比例合适，可出 现肉眼可见的反应物；
若比例不合适，即抗原或抗体过剩时，可 形成小分子抗原-抗体复合物。此种小分子复 合物多呈游离状态，不能为肉眼所见。
4、抗原-抗体反应的两个阶段
① 抗原-抗体特异性结合阶段：
特点：反应快，数秒钟至几分钟内完成。 ② 反应可见阶段：
特点：定量试验；敏感性较高。
应用： 测定血清中IgG、IgM、IgA等含
量和C3、C4等补体含量
单项琼脂扩散试验：
定量测定血清中IgG、M、A和单一补体含量 方法与原理
2、双向琼脂扩散试验（double agar diffusion ）
应用（1）定性试验：①鉴定可溶性抗原和抗体。 ②分析复杂抗原成分和抗体
（2）半定量试验：免疫血清稀释后进行的血清 效价测定。
4火箭电泳（rocket electrophoresis） 又称电泳免疫扩散
优点：敏感性同单扩散；所需时间短。 应用：快速测定标本中可溶性抗原的含量。
3、免疫标记技术
酶免疫测定法：ELISA 免疫测定技术 放射免疫测定法
化学发光免疫分析 酶免疫组化技术 免疫组化技术 免疫荧光技术 免疫胶体金技术 免疫电镜技术 免疫印迹技术 — Western blotting法
第二十二章
免疫学检测技术的基本原理
教学大纲
掌握 熟悉 了解
体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素； 抗原抗体体外反应的类型。
抗原抗体反应的检测方法； 免疫细胞的分离技术； 免疫细胞功能的测定。
免疫学检测方法的应用。
第一节 体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素
一、抗原-抗体反应的特点及检测原则
特点： 1.高度特异性 2.表面化学基团之间的可逆结合 3.适宜的抗原抗体浓度和比例 4.抗原抗体反应的两个阶段： 1）抗原抗体特异性结合阶段 2）可见反应阶段
概念：颗粒性抗原直接与相应抗体结合出现的凝集现象。
检测方法： （1）玻片法： 特点 定性试验； 用已知抗体检测未知抗原； 本法简捷快速；
（2）试管法： 特点 半定量试验；
用已知抗原检测未知抗体的相对含量。
应用 肥达反应——伤寒或副伤寒； 外斐氏反应——立克次体病 瑞特反应——布氏菌病
2、间接凝集反应（indirect agglutination） 概念：将已知可溶性抗原或抗体与免疫无关的载体颗粒结合形成致敏颗
特点：所需时间较长，从数分钟、数小时到 数日不等，且受电解质、温度和酸碱度等因 素影响。
二、抗原-抗体反应的影响因素
1.电解质：
在电解质作用下，抗原-抗体复合物失 去较多负电荷，使彼此连接出现肉眼可见的 凝集或沉淀现象。
试验中常用0.85%的NaCl溶液作为 稀释液，提供适当浓度的电解质。
2.温度 提高浓度可增加抗原与抗体分子碰撞机会，