溶
胶
准备胶槽
凝胶冷却至50° 凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5µg/ml EB至终浓度 至终浓度0.5µg/ml
铺
胶
凝胶凝固后取出梳子
加缓冲液
准备样品
点
样
电Байду номын сангаас
泳
注意观察溴酚蓝染液的迁移
紫外灯下观察电泳结果
照
相
不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围 不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围
琼脂糖浓度（ 琼脂糖浓度（%） 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 分离范围（kb） 分离范围（kb） 55-60 11-20 0.80.8-10 0.50.5-7 0.40.4-6 0.20.2-4 0.10.1-3
琼脂糖凝胶中DNA的观察 琼脂糖凝胶中DNA的观察
溴化乙锭（EB）—DNA：紫外光下 红色荧光 溴化乙锭（EB） DNA：
主要实验器材
电泳仪
缓冲液 琼脂糖
凝胶槽
梳子 电泳槽 取液器
溴酚蓝
电泳槽结构
操作步骤
琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB 琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却， 凝胶板的制备：加梳子， 凝胶板的制备：加梳子，倒胶 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝 加样：加样端为负极（黑） 加样：加样端为负极（ 电泳：5V/cm 电泳： 观察：紫外灯下观察，照相 观察：紫外灯下观察，
DNA琼脂糖凝胶电泳 DNA琼脂糖凝胶电泳
实验原理
琼脂糖为链状多糖 →绳状琼脂糖束→大网孔型 绳状琼脂糖束→ 凝胶 ——分离、鉴定、纯化DNA ——分离 鉴定、纯化DNA 分离、 影响DNA迁移率的因素 DNA分子的大小 迁移率的因素： 分子的大小、 影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构 象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成 凝胶浓度，电压， 缓冲液pH>DNA Pi，DNA带负电荷 带负电荷， 缓冲液pH>DNA Pi，DNA带负电荷，迁移率与 分子量对数成反比 DNA分子构象影响迁移率 共价闭环DNA> DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA>线 分子构象影响迁移率： 状DNA>开环DNA DNA>开环DNA