激活补体对胸腺和脾的T细胞进行杀伤。
实 验 原 理 示 意 图
MAC
T Cell
T细胞+抗Thy-1抗体 + 补体
细胞溶解现象
实验分组
四人一组，1只小鼠/组。
两人做脾，两人做胸腺。
物品分配
器材名称 加样器 吸头 载玻片/盖玻片 显微镜 小试管 滴管 平皿 刻度吸管(5ml) 剪刀、镊子 (直,弯) 纱布块 量/组 1把 12个 4套 1台 6支 2支 1对 1支 1套
4. 按下图加样：>> 5. 混匀后放置37℃水浴，孵育40分钟。 6. 取出后每管加入 50ul 台酚兰染液，混匀后立即取出染色的
细胞悬液 20ul 滴到玻片上，用盖玻片盖上，在显微镜下观 察。
7. 观察结果：计数 200 个细胞中死细胞数 ( 死细胞形态为肿胀
变大，失去折光性，呈兰色)。
加样方法
2块
试剂名称 PBS 抗Thy-1血清 台酚兰 补体 小鼠
量/组 10ml 0.3ml 1瓶 0.5ml 1只
操作步骤
1. 将3ml PBS加入平皿中。 2. 小鼠脱颈处死，取脾和胸腺 (分别位于左侧腹部和胸骨柄处 ) 3. 取胸腺和脾脏分别放到平皿中，用直头镊子固定组织，用
弯头镊子轻压组织，将其捣碎，再将3-4层纱布覆盖到组织 上，然后用滴管隔着纱布将细胞悬液吸出。

台酚兰染色时间不要太长，因为台酚兰本身具有一
定的毒性作用，可致细胞死亡。

补体要新鲜采集，三只以上的豚鼠的血清混合。
补体依赖性细胞毒实验的应用
细胞性抗原的测定 单克隆抗体的筛选和鉴定 组织相容性抗原的检查与分型

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试管
靶细胞
阳性管(ml) 阴性管(ml)
100 100
抗Thy-1血清
PBS 补体
100
— 100
—
100 100
结 果 判 定
Ag+Ab+C Ag+C
阳性管
阳性管
阴性管
细胞毒百分率(%)= (1-
阳性管活细胞数
阴性管活细胞数
)×100%
注意事项

靶细胞浓度要适中，过高或过低均会影响试验结果 。
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2015级硕士 免疫学实验课
补体依赖细胞毒试验
实 验 原 理
Hale Waihona Puke 细胞性抗原与特异性抗体(IgG1,2,3或IgM)的结合可
激活补体活化的经典途径，引起细胞膜损伤，膜通
透性改变而吸收染料，使细胞着色，胀大而死亡，
失去正常的折光性。根据死细胞的多少判断细胞毒
性的强弱。

本次实验采用抗 Thy-1 血清 (Thy-1 是 T 细胞的一种表 面标志 ) 与小鼠的胸腺和脾的 T 细胞相互作用，通过