实验原理
• 在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物 与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸 光度，进而求得被测物质的含量。 因此，显色条 件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测 量结果的准确性。 为了使测定有较高的灵敏度和 准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测 量 条件。通常所研究的显色反应条件有显色温度 和时间，显色剂用量，显色液酸度， 干扰物质的 影响因素及消除等，但主要是测量波长和参比溶 液的选择。对显色剂 用量和测量波长的选择是该 实验的内容
实验步骤
• 样品处理 取熟鸡蛋黄称重16.5g置于蒸发皿中，捣碎， 在通风处中小火加热，直至不再冒烟为止， 然后将其放入马福炉内灰化（约一天一夜）， 去处冷却后，加入1：1的盐酸，并用小火加 热使其全部溶解，然后过滤，移入50ml的容 量瓶中，定容，摇匀，备用。
• • 1) 10μg·mL-1铁标准溶液配制 准确称取 0.8634g硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2· 12H2O于100mL 烧杯中，加60mL 3mol· L-1 H2SO4溶液，溶解后 定容至1L，摇匀，得100μg·mL-1储备液(可由实 验室提供)。用时吸取10.00mL稀释至100mL，得 10μg·mL-1工作液。 • 2) 系列标准溶液配制 取6个50mL容量瓶，分别 加入铁标准溶液0.00，2.00，4.00，6.00，8.00， 10.00mL，然后加入1mL盐酸羟胺，2.00mL邻二 氮菲，5mLNaAc溶液(为什么?)，每加入一种试剂 都应初步混匀。用去离子水定容至刻度，充分摇 匀，放置10min
实验仪器及药品
• 1.主要仪器与设备：721型分光光度计，马福炉， 电热炉，容量瓶，移液管，普通天平，电子天平， 比色管，电子天平，烧杯，移液管，比色皿，漏 斗及漏斗架等。 • 2.试剂： （1）400ug/ml铁标准溶液：准确称取 0.864g 分析纯NH4Fe(SO4)2•12H2O，置于烧杯 中用30ml 2mol/L盐酸溶解后移入500ml容量瓶中， 定容，摇匀。 • （2）20ug/ml 铁标准溶液：由400ug/ml的铁标准 溶液溶液准确稀释20倍而成。 （3） 0.2%邻二氮 杂菲溶液：准确称取邻二氮杂菲1g，置于试剂瓶 中，加500 ml水溶解。 • （4）10%盐酸羟胺溶液：称取盐酸羟胺固体50g， 置于试剂瓶中，加500 ml水溶解。
• 根据朗伯－比耳定律：A=εbc。 当入射光 波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内， 有色物质的吸光度A与 该物质的浓度c成正 比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c 为横坐标的标 准曲线，测出试液的吸光度， 就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即 食品中铁的含量。
• 邻二氮菲可测定试样中铁的总量的条件和依据： 邻二氮菲亦称邻菲咯啉 （简写phen），是光度法 测定铁的优良试剂。在pH=2～9的范围内，邻二 氮菲 与二价铁生成稳定的桔红色合物 （（Fe(phen)3）2+）。
• 此配合物的lgK稳 = 21.3，摩尔吸光系数 ε510 = 1.1×104 L· mol-1· cm-1，而Fe3+能 与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色， lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应 用盐酸羟胺(NH2OH· HCl)将Fe3+还原为 Fe2+，其反应式如下： • 2 Fe3+ + 2 NH2OH· HCl → 2Fe2+ + N2 + H2O + 4H+ + 2Cl• 测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜， 用邻二氮菲可测定试样中铁的总量
。
• 用吸量管取蛋黄溶液5ml置于50ml容量瓶中， 加入1.0m 10%盐酸羟胺溶液，摇匀，2min 后加入1.0mol/L NaAc溶液5.0ml再分别加 入1.5ml 0.2%邻二氮杂菲溶液，定容至离 刻度线1cm处测量PH，若PH较小,则加入 8mol/ml的NaOH调节PH至5-6位为止，记 录滴数为10滴，并测量其吸光度。
• 吸光度的测定 • 用1cm比色皿，在510nm波长处，测定1-7号溶液 的吸光度，以50ml溶液中的铁含量为横坐标，相 应的吸光度为纵坐标，利用1-6号系列标准溶液， 绘制标准曲线，由7号溶液的吸光度在标准曲线上 查出8.0ml蛋黄溶液中铁的含量。平行测两次吸光 度，取平均值。计算原未知液中铁的含量（μg/ml 表示）。
• （5）1mol/L NaAC 溶液：称取NaAC固体68g， 置于试剂瓶中，加500 ml水溶解。 、 (6) 0.4 mol/L NaOH溶液：称取8.0g NaOH固体于试剂瓶 中，加500 ml水溶解。 (7) 2mol/l HCl溶液： 用移液管准确移取浓盐酸10ml于50ml容量瓶中， 定容，摇匀。 (8) 1：1 HCl溶液：用移液管准确 移取浓盐酸25ml于50ml容量瓶中，定容，摇匀。 （9）8mol/LNaOH溶液：称取160.0gNaOH固体 溶于烧杯中，冷却后移入500mL容量瓶，定容， 摇匀。 • 3.实验用品：鸡蛋黄。
食品中铁含量的测定
铁含量测定方法
食品中铁的测定有火焰原子吸收光谱法,二硫 腙比色法(邻菲啰啉,磺基水杨酸,硫氰酸盐比 色法等）两种国家标准方法。我们采用分光 光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用 邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性， 且稳定性好，干扰易消除等优点。
实验目的
• 1了解分光光度法测定物质含量的一般条件 及其选定方法 。 • 2掌握邻二氮杂菲分光光度法测定铁的方法 • 3了解721型分光光度计的构造和使用方法