Tunel染色
操作流程及步骤：
实验准备：
1、固定溶液：4%的聚甲醛。

2、封闭溶液：3%H2O2的甲醇溶液，共计4ml。

其中30%H2O2 ：甲醇为1:9
即：400ul30%H2O2+3.6ml甲醇。

3、透化溶液：0.1g柠檬酸+100mlddH2O+100ulTriston[1]。

实验步骤：
1、磷酸盐缓冲液（PBS）洗3次每次5min[2-3]。

2、固定溶液：4%的聚甲醛固定1h[3-5]。

3：PBS洗4次每次7min[3]。

以下步骤全部避光:
4、在15-25℃下与封闭溶液200ul孵育10min[3,6]。

5、PBS洗4次每次7min[3]。

6、透化溶液5min（4℃摇床）。

7、PBS洗4次每次7min[3]。

8、tunel溶液配制瓶1：瓶2=1:9（遮光），每孔加200mltunel混合物孵育
60min[3,7] 。

8、PBS洗4次每次7min[3]。

9、加DAPI 200ml 15min[3,8]
10、PBS洗4次每次7min[3]。

11、荧光显微镜拍片。

待学习…
心得体会及注意事项：
1、因柠檬酸量太少直接配制所需溶液量误差较大所以配制100ml体系。

2、洗去培养液。

3、加完液后放在摇床上。

4、每孔加200ul4%的聚甲醛。

5、为防止细胞聚集成团，宜在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动的同时进行
固定。

6、封闭细胞内的氧化酶。

7、染凋亡细胞的DNA。

8、DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，能够与DNA
强力结合的荧光染料，用于荧光显微镜对比观测。

所有细胞DNA均可染色。

目的及原理
目的：检测细胞凋亡
原理：TUNLE染色即原位末端转移酶标记技术。

凋亡细胞的DNA双链断裂或一条链出现缺口，产生一系列3′-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶作用下，将脱氧核糖核苷酸和生物素所形成的衍生物标记到DNA的3′末端，从而进行凋亡细胞的检测。

TUNLE染色是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征。