AST L 天门冬氨酸 酮戊二酸 草酰乙酸 L 谷氨酸

经60分钟反应后，加入2,4-二硝基苯肼终止反 应，并与反应液中的二种α -酮酸生成相应的 2,4-二硝基苯腙。在碱性条件下，两种苯肼的 吸收光谱曲线有差别，在500nm～520nm处 差异最大，草酰乙酸生成的苯腙的呈色强度显 著大于α -酮戊二酸苯腙。据此可用比色法测 定AST活力。
标准曲线制作（AST赖氏法）
【实验要求】 掌握血清天冬氨酸氨基转移酶测定（赖氏法） 的原理 熟悉操作方法及标准曲线的绘制； 了解实验注意事项，方法评价及临床意义。 【实验任务】 一大组绘制二条标准曲线 2个同学一组测出样品管中吸光度值，并在曲 线上查值。

【实验原理】

AST催化天门冬氨酸与α -酮戊二酸间的氨基移 换反应，生成草酰乙酸和谷氨酸：
【注意事项】


1. 本法的缺点是标本AST活性高时，草酰乙酸对AST有反馈 抑制，使测定结果偏低；酮血症中乙酰乙酸及β-羟丁酸，因 设对照管不会引起测定结果假性增高。 2. 血清中AST在室温下可保存2天，在4℃冰箱可保存1周，在 -25℃可保存1个月。严重溶血、黄疸及脂血血清可增加测定 的吸光度。
【实验评价】



1.本法为终点法，难以确定酶促反应30～60min内产物生成 量与时间成正比。同时也存在底物和2，4-二硝基苯肼用量不 足的问题，由于标本AST活性高时，草酰乙酸对AST显示反馈 抑制，使AST活性下降，测定结果偏低。 2.重复性差 血清中含有多种酶对AST测定产生负干扰现象， 如耦联转氨基作用，即AST作用生成的产物草酰乙酸会不可 逆地转变为丙酮酸而成为ALT的底物影响AST的测定；产物旁 路效应，生成的草酰乙酸可被血清内源性苹果酸脱氢酶催化 而消耗，草酰乙酸自发转变成的丙酮酸可被血清中的LD催化。 本法最适条件下的变异系数为8%，常规条件下的变异系数＜ 16%。 3.操作简便，实验条件要求不高，便于基层医疗单位开展。





【参考范围】 0～50卡门单位 【临床意义】 1. 用于肝病的诊断 血清中AST可来源于肝细胞，各种 肝病可引起血清AST升高，有时可达1200U/L，中毒 性肝炎病人还可更高。 2. 用于心肌梗死的诊断 AST在心肌细胞中含量较多， 心肌梗死病人发病时，血清中AST活性增高，在发病 后6~12小时内显著增高，在48小时达到高峰，约在 3～5天恢复正常。 3.其他疾病的协助诊断 胸膜炎、肾炎以及肺炎病人等 也可引起血清AST的轻度增高。
【操作】 1、试剂配制 1份4N 氢氧化钠和9份蒸馏水混合均匀，即可 使用 将酶标准液（3.0mmol/L）取出1ml加0.5ml 蒸馏水使酶标准备液浓度变为2.0mmol/L 2.AST标准曲线的绘制 （1）按表1向各管加入相应试剂。


表一：
管号 0 1
225 25 50 250
2
200 50 50 250
3175 ຫໍສະໝຸດ 5 50 2504150 100 50 250
基质液（ul） 250 2.0mmol/L 标准液（ul） 蒸馏水（ul） 50 2,4-二硝基 苯肼（ul） 活力单位 （U） 250
混匀，37℃水浴20分钟 0 24 61 114 190
取出，各管加稀释氢氧化钠2.5ml,室温放置3分钟上机波长 510nm测定.以蒸馏水调零，测定各管吸光度。各管吸光度 减去“0”号管吸光度为该管的吸光度值。 以吸光度值为纵坐标，卡门氏单位为横坐标，各标准管的 吸光度值对活性单位作图，即为标准曲线。
3. 标本的测定 按表2操作。

表二：
对照管 基质液（ul） 样品（ul） 显色剂 50 250 μ L 混合37℃水浴30分钟 250 μ L 样品管 250 50
基质液（ul） 37℃水浴20分钟
稀释氢氧化钠
250
2.5ml 2.5ml
室温放置3min，在波长510nm处，以蒸馏水调零，读取各 管吸光度。测定管吸光度减去对照管吸光度即为标本的吸 光度，查标准曲线，即可得到ALT的卡门单位。。