苦参中氧化苦参碱的提取工艺研究摘要目的：利用正交试验，确定最佳提取工艺，并考察阳离子交换树脂法精制苦参中氧化苦参碱的效果，且与其它大孔树脂法进行了比较。
方法：采用HPLC法测定氧化苦参碱的含量。
结果：确定最佳工艺，即用10倍量于药材的1%醋酸溶液提取，两小时三次，用001×4强酸型阳离子交换树脂法较大孔树脂法可更有效的保留有效成分、去除杂质。
结论：优选得到的工艺简便易行。
关键词苦参；氧化苦参碱；正交试验；阳离子交换树脂Study on different extraction process of oxymatrine in RadixSophora flavescensAbstract Objective: To study the effect of cation exchange resin method in fefining of oxymatrine in Sophora flavescens, and to compare the results with that of macroporous resin. Orthogonal test was used to optimize the technology for extracting oxymatrine. Mehtods: HPLC was applied to analyze the content of oxymatrine in the samples. Results: The optimal extraction technology was as follows: the medicinal mateial was refluxed with 1% acetum for three times and each time was 2 hours. 001×4 cation exchange resin method was more effective than macroporous resin for refining oxymarine in Sophora flavescens. Conclusion: This optimized method is simple and efficient.Key words Radix Sophora flavescens; oxymatrine; orthogonal test; cation exchange resin 苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Art.的干燥根，有清热燥湿，杀虫，利尿之功效。
主要成分为氧化苦参碱、苦参碱、氧化槐果碱等多种生物碱类成分。
现代研究表明，氧化苦参碱具有抗心律失常，抗癌及抗衰老等活性。
目前，如何高效、快速提取、分离、纯化氧化苦参碱，满足其在医药、化妆品、植物生长调节剂等方面的不断增长的大量需求，研究不足，而且产品的纯度等方面均达不到要求，影响其药理活性的发挥和进一步的开发利用。
本文以氧化苦参碱为考察对象，对苦参的不同提取工艺进行比较，优选出氧化苦参碱的最佳提取工艺。
1 实验材料及仪器1.1 实验材料苦参，购于河北省安国，氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所）；001×4强酸型阳离子交换树脂、AB-8、D101、S-8大孔吸附树脂（南开大学化工厂）；乙腈、无水乙醇为色谱纯；水为自制高纯水；其余试药均为分析纯。
1.2 仪器高效液相色谱仪（Waters:510泵，2487紫外检测器）；JS-3030江申通用汉化色谱工作站（大连江申分离科学技术公司）；DRT-TM调温电热套（巩义市予华仪器有限公司）；Senco R 系列旋转蒸发仪；SHZ-IIIB型循环水真空泵（上海申生科技有限公司）。
2 实验方法及结果2.1 色谱条件和系统适用性条件以氨基键和硅胶为填充剂；柱温为30℃；流动相为乙腈:无水乙醇:3%磷酸（80:10:10）；检测波长为220nm。
理论板数按氧化苦参碱计算应不低于2500。
2.2 标准溶液的制备精密称取氧化苦参碱对照品5mg于50ml容量瓶中，用乙腈-无水乙醇（8:1）溶解并定容，混匀，即得标准溶液。
2.3 提取条件考察方案设计考虑到提取溶媒、溶媒用量、提取时间、提取次数等因素对提取的影响，每个因素选择三个水平，以L9(34)正交表进行实验研究，从而优选最佳提取工艺。
表1 因素水平表Table 1 Factors and levels of orthogonal test水平提取溶媒（A）溶媒用量（B）提取时间（C）提取次数（D）1 水 6 1 22 1%醋酸8 2 33 0.1%盐酸10 3 4实验方法及结果：精密称取苦参药材100g，分别根据正交表的实验研究，制备苦参提取液，滤过，吸取滤液1mL，用甲醇稀释并定容至一定体积。
按2.1项下条件测定氧化苦参碱的含量，并计算，结果见正交设计表。
表2 L9(34) 正交试验方案及结果Table 2 The scheme and results of L9(34) orthogonal test编号提取溶媒溶媒用量提取时间提取次数氧化苦参碱（g）1 11110.812 1222 1.323 1333 1.834 2123 2.045 2231 2.016 2312 2.137 3132 1.468 3213 1.919 3321 1.75K1 1.320 1.437 1.617 1.523K2 2.060 1.747 1.703 1.700K3 1.707 1.903 1.767 1.927R 0.740 0.467 0.150 0.4032.4 正交试验结果正交试验结果见表2。
由表2可得出，各因素作用主次为：A（提取溶媒）> D（提取次数）> C（提取时间）>B（溶媒用量）。
结果表明，A2B3C3D3组合为最佳提取路线，考虑到节约能源，选择A2B3C2D2，即选定10倍量于药材的1%醋酸回流提取3次，每次2h。
2.5 树脂吸附吸脱工艺筛选2.5.1 树脂柱预处理AB-8、D101、S-8大孔吸附树脂用95%乙醇浸泡24h，充分溶胀，并用乙醇洗至流出液加等体积蒸馏水无白色混浊现象，再用蒸馏水洗至无醇味备用。
001×4强酸型阳离子交换树脂用蒸馏水浸泡24h，充分溶胀，并用蒸馏水洗至流出液澄清，用2倍树脂体积1NHCl 洗2h，水洗至中性，用2倍树脂体积1NNaOH 洗2h，最后用3倍树脂体积1NHCl洗3h，用蒸馏水洗至中性。
2.5.2 氧化苦参碱提取液的制备取800g苦参粗粉，用8000mL1%醋酸回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，置旋转蒸发仪中，浓缩至约800mL。
平均分成8份，每份100mL 苦参水提液。
2.5.3 不同树脂吸附药液量考查分别量取处理好的4种树脂, AB-8、D101、S-8大孔吸附树脂和001×4强酸型阳离子交换树脂各60mL，分别装柱后平行进行以下试验。
向柱中不断加入上样液进行动态吸附，同时分别收集各流份，采用HPLC法对各流份进行检测，当有流份中明显出现氧化苦参碱时即认为吸附饱和。
表3 不同树脂吸附药液量树脂类型吸附药液量（ml）AB-8大孔吸附树脂80D101大孔吸附树脂100S-8大孔吸附树脂60强酸型阳离子树脂100结果表明：100ml AB-8、D101、S-8大孔吸附树脂和001×4强酸型阳离子交换树脂分别吸附80mL、100mL、60mL、100mL药液。
2.5.4 洗脱剂浓度的选择强酸性阳离子树脂用氨水碱化后、大孔吸附树脂分别用4倍树脂体积的水冲，30%醇洗、50%醇洗、70%醇洗、80%醇洗、95%醇洗，分别收集后，测定含量，分别监测出氧化苦参碱富集的位置。
实验结果表明，采用不同类型大孔吸附树脂分离苦参水提液中氧化苦参碱时，宜选用30%乙醇洗脱，而用强酸型阳离子树脂时，洗脱时宜选用80%乙醇。
2.5.5 不同型号树脂的筛选另外4份上样液，分别按上述不同树脂吸附药液量，上此4种树脂，大孔树脂分别用30%乙醇洗脱，强酸型阳离子树脂用氨水碱化后用80%乙醇洗脱。
最后将洗脱液置旋转蒸发仪中浓缩至干。
分别对这4种不同树脂处理后得到的提取物按2.1条件测定氧化苦参碱含量，关于苦参中氧化苦参碱的含量进行比较，见表3。
结果表明，强酸型阳离子树脂所得的提取物中的氧化苦参碱含量明显高于其它三种大孔树脂法，故认为强酸型阳离子树脂为纯化氧化苦参碱的最佳树脂类型。
表3 最佳树脂类型的确定Table 3 Selection of the optimal resins树脂类型含量%（氧化苦参碱）转移率（%）AB-8大孔吸附树脂15.35 85D101大孔吸附树脂 6.5 89S-8大孔吸附树脂26.9 71强酸型阳离子树脂76.9 93 实验结果表明，采用不同类型大孔吸附树脂分离苦参水提液中氧化苦参碱时，宜选用30%乙醇洗脱，而用强酸型阳离子树脂时，洗脱时宜选用80%乙醇。
以氧化苦参碱在提取物中的含量为考评指标，实验结果表明，苦参优选的最佳提取工艺是：10倍量于药材的1%醋酸回流提取3次，每次2h，合并提取液，滤过，直接用强酸型阳离子树脂（树脂用量为每ml树脂吸附1g药材）吸附后，用氨水碱化后用80%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，即得。
用此工艺制备的氧化苦参碱得率高。
参考文献：[1] 杨毅恒，翟所迪．酸性染料比色法测定鞣苦胶囊中苦参总生物碱的含量[J]．北京中医药大学学报，2004，27(6)：63—65。
[2] 刘斌，石任兵，周素蓉．苦参汤有效部位总生物碱含量测定方法研究[J]．北京中医药大学学报，2004，27(2)：76—79。