6.注意确定取材部位和包埋切面的方向，选好组织块的切面应熟
悉器官组织的结构并据此决定其切面的走向，
7. 组织清除：切除(清除)不需要的部分，特别是组织周围的脂肪， 应尽可能清除掉，以免影响以后的程序和观察。
8.明确编号，登记
2.2 组织标本的固定
新鲜的组织被割取后,由于细胞内酶的作用和细菌的
繁殖，可引起组织的自溶和腐败。因此，割取组织块后，
组织取材注意事项
1.组织要求离体后30min内浸入固定液，尤其是开展分子生物学研究。 动物放血处死后立即取材，最好在心脏还在跳动时立即取材，马
上投入固定液中；
2.注意防止人为因素的影响 切取组织的刀剪必须锋利，刀要足够长。切分组织块时，不
可来回切割。夹取组织时，镊子要轻，切勿挤压。以免损伤组织；
取材时，组织块可稍大一点，以便在固定后，将组织块的不平整 部分修去。
(3) Bouin’S液
苦味酸饱和水溶液 75ml
甲醛
冰醋酸
25ml
5ml
是常用的良好固定液，渗透速度快，收缩小，组织固定均匀，
不使组织变硬变脆，保持结构完整，适合于各种胚胎连续切片，对
于肝、皮、胰腺特殊染色效果好。固定为12～24小时，但固定过久， 对碱性染料着色不利。
（4）Carnoy氏液
纯酒精 氯仿 冰醋酸 60ml 30ml 10ml
石蜡切片及Hห้องสมุดไป่ตู้E染色技术
石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片 和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来 的。现以石蜡切片为例，介绍切片标本的制备 方法。
组织学制片步骤： 取材 固定 冲洗 脱水 透明
浸蜡
包埋
修块
切片
贴片
烤片
染色
封片
观察结果
取材
根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求 新鲜、准确、完整，材料要避免挤压、挫伤、干枯。 所采集材料应立即放入固定剂，并编号，注明采集 时间、地点、名称、组织部位，所取组织块要大小适当， 即要能说明问题，又要考虑固定剂的穿透能力。
（10％福尔马林） 。 甲醛渗透力强，固定均匀。但脱水后有较大收缩，在 某些方法中要求中性甲醛，可在原装瓶内放入碳酸镁，pH 为7.6，能长期保持中性。甲醛固定后，通常需在流水中冲 洗24-48小时,否则影响染色效果。
(2) 4％多聚甲醛固定液
最好是动物经灌注固定取材后，继续固定2-24h。该固定剂较 为温和，适用于组织标本的长期保存。
固定液的选择
固定液的种类很多。可分为两大类：单纯固定液和 混合固定液。 单纯固定液：是用一种化学试剂作为固定液，如乙 醇、甲醛溶液、冰醋酸等,它们只是对细胞的某种成分固 定得较好；不能将细胞所有的成分都保存下来。如升汞 固定蛋白质、冰醋酸固定核蛋白、无水乙醇可固定糖原 等，单纯固定液有一定局限性。
甲醇60ml，氯仿30ml，醋酸10ml，混均后4℃保存备用，对
核内抗原的保存效果较好。
(7)丙酮及醇类固定剂
丙酮、乙醇类固定剂其固定原理主要是对蛋白质的沉淀而
发生固定作用。酒精是一种还愿剂，用于组织固定以95%的浓度
为宜，酒精固定后的组织细胞核着色不良，一般用于糖元的固 定。甲醇、丙酮常用于细胞固定。
② 使细胞内的蛋白质、糖、脂肪等各种成分沉淀保存下来从而
保存细胞的各种组成成分使其保持与生活时相近似的形态和 结构； ③ 因沉淀及凝固的关系，使细胞内不同的成分产生不同的折光 率，造成光学上的差别使原来在生活情况下看不清楚的结构 变得清晰易见，且有的固定剂还有助染作用(如醋酸、苦味 酸)，从而使细胞各部易于染色； ④ 固定剂还兼有硬化作用，使柔软组织硬化而不易变形，有利 于操作。
此固定液渗透速度快，2mm以下小块组织固定时间
2～4小时，它是细胞极好的固定液，适合于细胞分裂、 RNA、DNA及糖元等固定。固定后直接入纯酒精脱水。
(5) PLP固定液：
过碘酸-赖氨酸-多聚甲醛固定液。该固定剂较适合于富含 糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
(6) Methacarn固定液
混合固定液：是用几种化学试剂，按一定的比例混 合配制而成的，由于各种试剂的优缺点互相弥补，因此 可产生较好的效果。
（1）甲醛固定液：
是一种还原剂，呈酸性，原液浓度为37%～40%，配成 固定液的浓度为4%，习惯上称为10%，配制时取甲醛原液
10ml，加蒸馏水（D.W）或缓冲液至100ml，为甲醛固定液
3.组织块的大小
厚为0.2～0.5cm，大小可根据需要而定。柔软组织不易切小, 可先取稍大的组织块固定2 ～ 3h，等组织稍硬后再切成薄的小块 继续固定。
4.取材应注意清洁，组织块上如有血液、污物和粘液沾着，应用 生理盐水洗涤后再入固定液。 5.取材时间：原则上，应尽快取材，但比较大的手术标本如胃、 肺、肠等器官，最好先固定后取材。
应立即采用一种方法，将组织尽可能保持原有的形态结 构，且有利于保存和适于制片的操作，这一步骤称为固
定。化学固定法就是用化学试剂配制成固定液使组织固
定。 固定是制片极为关键的一个步骤，制片质量的优劣，
除与材料的新鲜程度有关外，还取决于最初的固定是否
适当和完全。
固定的目的和作用在于：
① 防止组织自溶和腐败；
注意事项：
1. 根据材料的性质和制片的目的选择固定液。 2. 一般固定液都以新配为好，有些混合固定液的成份之间会发生氧 化还原作用，一定要在使用前才混合。配好后应贮存在阴凉处， 不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。 3. 固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20-30倍，有些 水分多的材料，中间应更换1-2次固定液。 4. 材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器 外上标签，以免相互混淆。
一般组织学取材稍大，细胞学取材稍小，动物组织
取材要稍大，植物组织取材稍小。
动物组织标本的取材
动物的处死方式一般为活杀，组织标本来源较新鲜，
10min内即可完成固定和冷冻保存，脑组织和神经组织应
采用灌注固定后，再进行后固定。 制片所需的材料要求越新鲜越好，尤其是细胞学方面 的研究对材料的新鲜程度要求更严。因此，要从活的动物 体上采取材料，在一般情况下，要对动物施行麻醉，然后 再割取材料加以固定。所用的麻醉药品，必须以不影响细 胞结构为原则。
固定的方法
（1）小块组织固定：从人体或动物取出组织，切成小块投入固 定液中固定。
（2）局部注射固定：某些组织和器官其固定液不易渗透或渗透 较慢，渗透不均匀，还有些器官为保持外型或卷缩，可采 取局部注射固定方法，固定4～6小时后，再将组织切成小 块继续投入固定液中固定。
（3）整体注射固定：此法主要用于科研和大体解剖，亦可用于 组织学教学制片。