土壤酸性磷酸酶活性测定
土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。

在pH 4-9 的土壤中均有磷酸酶。

积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。

研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。

磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。

磷酸苯二钠比色法
1.试剂配制
（1）0.5%磷酸苯二钠（用缓冲液配制）。

（2）pH5醋酸盐缓冲液。

a.醋酸盐缓冲液（pH=5.0）
A：0.2mol/L 醋酸溶液（11.5mL，稀释至1000mL）
B：0.2mol/L 醋酸钠溶液（16.4g C2H3O2Na 或27.2g C2H3O2Na·3H2O 定容至1000mL）
14.8ml A + 35.2ml B混合即得
（3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。

保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。

（4）酚的标准溶液：
酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中。

酚工作液——取10ml 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01mg酚）。

（5）甲苯。

（6）0.3%硫酸铝溶液。

标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11、13ml 酚工作液，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。

以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标（mg）绘成标准曲线。

2.操作步骤
称5g风干土置于200ml三角瓶中，加2.5ml 甲苯，轻摇15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠（用醋酸盐缓冲液配制），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h后于培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤。

吸取3ml 滤液于50ml 容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述方法显色。

用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，在分光光度计上于660nm 处比色。

3.结果计算
磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。

酚（mg）=a*8
式中a—从标准曲线上查得的酚毫克数
8—换算成1g 土的系数。