反应的结果决定被测物是否是蛋白质。 反应的结果决定被测物是否是蛋白质。颜色 反应是一些常用的蛋白质定性和定量测定的 依据。重要的颜色反应有： 依据。重要的颜色反应有： 1.双缩脲反应 1.双缩脲反应 将尿素加热到180℃ 180℃， 将尿素加热到180℃，则两分子尿素缩 合成一分子双缩脲，并放出一分子氨。 合成一分子双缩脲，并放出一分子氨。双缩 脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生紫红色 络合物，此反应称双缩脲反应。 络合物，此反应称双缩脲反应。蛋白质分子 中含有许多和双缩脲结构相似的肽键， 中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，因此 也能起双缩脲反应。 也能起双缩脲反应。通常可用此反应来定性 鉴定蛋白质， 鉴定蛋白质，也可根据反应产生的颜色在 540nm处比色，定量测定蛋白质。 540nm处比色，定量测定蛋白质。 处比色
酚类化合物有此反应，酪氨酸含有酚基，故 酚类化合物有此反应，酪氨酸含有酚基， 酪氨酸及含有酪氨酸的蛋白质都有此反应。 酪氨酸及含有酪氨酸的蛋白质都有此反应。 4.茚三酮反应 4.茚三酮反应 蛋白质与茚三酮共热， 蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝紫色的 还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。 还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。此反应 为一切氨基酸及α-氨基酸所共有。含有氨 为一切氨基酸及α 氨基酸所共有。 基的其他物质亦呈此反应。 基的其他物质亦呈此反应。
实验
一、目的
蛋白质的颜色反应
掌握鉴定蛋白质的原理和方法。 掌握鉴定蛋白质的原理和方法。
二、原理
蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂 作用，可产生特定的颜色反应， 作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所 含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。 含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。颜色 反应不是蛋白质的专一反应， 反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质 亦可产生相同颜色反应， 亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色
三、操作： 操作：
1.双缩脲反应 1.双缩脲反应 取少许结晶尿素放在干燥试管中， ①取少许结晶尿素放在干燥试管中，微火加 尿素溶化并形成双缩脲， 热，尿素溶化并形成双缩脲，释出的氨可用
红色石蕊试纸试之。 红色石蕊试纸试之。至试管内有白色固体出 停止加热，冷却。然后加10%NaOH 现，停止加热，冷却。然后加10%NaOH 溶液 混匀，观察有无紫色出现。 1mL 混匀，观察有无紫色出现。 另取一试管，加蛋白质溶液10 10滴 ②另取一试管，加蛋白质溶液10滴，再加 溶液10滴及1%CuSO4溶液4 10滴及1%CuSO4溶液 10% NaOH 溶液10滴及1%CuSO4溶液4滴，混 观察是否出现紫玫瑰色。 匀，观察是否出现紫玫瑰色。 2.蛋白质的黄色反应 2.蛋白质的黄色反应 在一试管内，加蛋白质溶液10 10滴及浓硝 在一试管内，加蛋白质溶液10滴及浓硝 加热，冷却后再加10%NaOH 酸3～4滴，加热，冷却后再加10%NaOH 溶液 观察颜色反应。 5滴，观察颜色反应。 3.米伦反应 3.米伦反应 用苯酚做实验： 0.5%苯酚溶液 苯酚溶液1mL ① 用苯酚做实验：取0.5%苯酚溶液1mL 于
2.蛋白质的黄色反应 2.蛋白质的黄色反应 是含有芳香族氨基酸特别是含有酪氨酸 和色氨酸的蛋白质所特有的呈色反应。 和色氨酸的蛋白质所特有的呈色反应。蛋白 质溶液遇硝酸后，先产生白色沉淀， 质溶液遇硝酸后，先产生白色沉淀，加热则 白色沉淀变成黄色， 白色沉淀变成黄色，再加碱颜色加深呈橙黄 色，这是因为硝酸将蛋白质分子中的苯环硝 产生了黄色硝基苯衍生物。例如皮肤、 化，产生了黄色硝基苯衍生物。例如皮肤、 指甲和毛发等遇浓硝酸会变成黄色。 指甲和毛发等遇浓硝酸会变成黄色。 3.米伦反应 3.米伦反应 米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞、 米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚 硝酸汞的混合物，蛋白质溶液加入米伦试剂 硝酸汞的混合物， 后即产生白色沉淀，加热后沉淀变成红色。 后即产生白色沉淀，加热后沉淀变成红色。
试管中，加米伦试剂约0.5mL，小心加热，溶 试管中，加米伦试剂约0.5mL，小心加热， 0.5mL 液即出现玫瑰红色。 液即出现玫瑰红色。 用蛋白质溶液做实验： 蛋白质溶液， ② 用蛋白质溶液做实验：取2mL 蛋白质溶液， 米伦试剂， 加0.5mL 米伦剂，此时出现蛋白质的沉淀 因试剂含汞盐及硝酸之故) 小心加热， (因试剂含汞盐及硝酸之故)，小心加热，凝 固之蛋白质出现红色。 固之蛋白质出现红色。 4.茚三酮反应 4.茚三酮反应 蛋白质溶液置于试管中， 取1mL 蛋白质溶液置于试管中，加0.5mL 茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现( 茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现(注 此反应必须在pH5 pH5～ 进行) 意：此反应必须在pH5～7进行)。
四、结果： 结果：