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抗氧化性方法

取0.2mL 甲醇,加入0.3 mL样品溶液(浓度50-800ug/mL ,甲醇配制),混匀,加入2.5mL 75uM DPPH(甲醇溶解)溶液,室温放置30min ,于517nm处测吸光值。

清除率=[A0-(A-A b)/A0]×100%
A0:不加入样品,DPPH吸光值(对照)
A:样品和DPPH吸光值
A b:样品,不加DPPH吸光值
2 O2-·
PMS吩嗪硫酸甲酯
NADH 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
NBT氯化硝基四氮唑蓝
0.1mL 样品溶液,加入1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)---78uM NADH, 1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)- --10uM PMS ,1mL 16 mM Tris-HCl (pH 8.0)- --50uM NBT, 25min保温5 min后于560 nm 处吸
光值。

清除率=(1-A
样品/A
对照
)×100%。

3 邻苯三酚自氧化
0.1mL 样品溶液,加入2.8mL 0.05M Tris-HCl (pH 8.0)---1mM EDTA,加入0.2mL 6mM 邻苯三酚。

室温迅速振摇,于325nm处每30s 测吸光值至4min。

清除率=(1-样品斜率/对照斜率)×100%
4 FRAP reagent:
10体积300 mmol/L pH3.6醋酸缓冲液,1体积10 mmol/L TPTZ---40 mmol/L HCl 溶液,1体积20mmol/L FeCl3.
1.5mL 新配制FRAP reagent加热至37℃,于593 nm处测空白吸光值。

然后加入50uL 样品溶液和150uL去离子水。

8min后测吸光值。

FRAP值=A样品-A空白
2.1 清除羟基自由基(HPLC法)
2.1.1色谱条件
色谱柱:Angilent HC-C18柱((4.6×250mm,5um); 流动相:甲醇:0.1% H3PO4=30:70;流速:
1ml/min;柱温:35℃;紫外检测波长:254nm;进样量:20ul。

取1.5ml 0.18mmol/L对羟基苯甲酸,加入1.0ml蒸馏水,1.0ml 0.3%H2O2,,紫外照射30min前后进行HPLC分析计算清除率。

清除率=(空白反应后3,4-二羟基苯甲酸峰面积-样品反应后生成3,4-二羟基苯甲酸峰面积)/(空白反应后峰面积-空白反应前峰面积)
2.2 清除超氧阴离子(邻苯三酚自氧化)
0.1ml不同浓度的多糖溶液,加入5ml 0.05mol/L Tris-HCl buffer(pH 8.2),25℃水浴10min,加入0.2ml 6mmol/L 邻苯三酚,摇匀后每隔30s,4min内于325nm处测吸光值。

以0.1ml水代替多糖溶液,0.2ml水代替邻苯三酚作参比液,0.1ml水代替多糖溶液作对照溶液,其余同上述方法操作。

清除率=(1-样品斜率/对照斜率)×100%。

2.3 清除DPPH
反应体系:1ml浓度不同的多糖溶液,2ml0.6mmol/L DPPH,1ml 95%乙醇,2m0.6mmol/L DPPH加入3ml 95%乙醇作对照液,5ml 95%乙醇作参比,混匀后暗处反应30min,517nm处测定吸光值。

清除率=(1-A
样品/A
空白

2.4 分光光度计法测·OH
FeSO4溶液(1.8mmol/mL):称取FeSO4晶体0.2736g,用水定容于100mL容量瓶中,使用时稀释9倍
H2O2(0.3%):取30%的H2O2溶液1.0mL ,用水定容于100mL容量瓶中。

水杨酸-乙醇(1.8 mmol/mL):取水杨酸固体0.2486g,用无水乙醇定容于100mL 容量瓶中,使用时稀释9倍。

向试管中加入一系列不同浓度多糖溶液1.0mL ,FeSO4溶液2.0mL,水杨酸-乙醇1.5mL,最后加H2O2 0.1mL 启动反应,振荡混合,水浴37℃,保温30min,在波长510nm下测量各自的吸光值。

以1.0mL蒸馏水代替多糖溶液,其余操作同上作为空白。

清除率=[(A0-A s)/A0]×100%
A0为空白管的吸光度,A s为加入样品后的吸光度。

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